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目的
观察关节软骨细胞随传代细胞骨架(CSK)及糖胺多糖(GAG)合成量的变化,并探讨两者关系。
方法雄性8月龄新西兰白兔8只,空气栓塞处死,无菌酶解法分离双膝关节软骨细胞并行单层培养,取原代(P0)及传1、2代(P1、P2)的软骨细胞,分别接种于底部置有圆形盖玻片的24孔板中爬片并于细胞贴附后固定。以免疫荧光抗体对各代软骨细胞CSK染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察各代软骨细胞CSK形态并分别测定其CSK蛋白荧光强度。待每代细胞融合后,换无血清培养液,并于换液后12、24、36、48、60 h分别抽取上清液以阿尔新蓝法检测GAG浓度。
结果软骨细胞随传代其中间纤维网状结构变松散且核周密集分布减少,而在细胞周边形成的微管突起增多。软骨细胞CSK蛋白荧光强度测定结果显示,P1软骨细胞肌动蛋白荧光强度较P0升高,差异有统计学意义(P< 0.05),而P0与P2、P1与P2差异均无统计学意义(P>0.05);波形蛋白和微管蛋白荧光强度随传代逐渐下降,P0、P1、P2软骨细胞间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。软骨细胞在各个时间点的上清液GAG浓度均随传代逐渐下降,P0、P1、P2软骨细胞间两两比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。
结论软骨细胞随传代其CSK主要成分发生形态及蛋白表达强度的改变,同时其合成基质之一的GAG合成量也随之下降,表明软骨细胞传代后特性的变化,且二者可能存在一定关联。