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多枝赖草基因组Mb级DNA制备和酶切方法的优化

来源 :华北农学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：luoweitao2007

【摘 要】

：

Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC，PAC，BAC，BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础。以浓度0．4％（m／m）NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核，经钢丝细胞筛过滤，多次回收

【作 者】

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徐粤宇 周玉雷 赵茂林 王志平 王克武 张艳 

【机 构】

：

首都师范大学,甘肃农业大学,北京市农林科学院,北京市土肥工作站

【出 处】

：

华北农学报

【发表日期】

：

2007年6期

【关键词】

：

多枝赖草 Mb级DNA 基因组文库 脉冲交变电场电泳 酶切 Leymus multicaulis   Megabase-size DNA  Genomic li 

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Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC，PAC，BAC，BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础。以浓度0．4％（m／m）NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核，经钢丝细胞筛过滤，多次回收滤渣和离心上清中的细胞核，相差显微镜调浓度达10^8个／mL后，经laMP包埋，蛋白酶K降解核蛋白，脉冲电泳纯化回收后，在LMP胶块中2Mb以上DNA的浓度约为250ng／μL。在胶中经HindⅢ部分酶切再用脉冲电泳回收不同大小范围的DNA，电洗脱浓缩除盐后浓度约为25ng／μL。用此方法得到的核D

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