【摘 要】
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目的 探讨抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯(paraquat,PQ)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)转分化的影响及相关分子机制.方法 将MRC-5细胞分为三组,对照组(Control组):不加药物处理;PQ组:以50 μ mol/L的PQ刺激MRC-5细胞72 h诱导建立转分化模型;PQ+DKK1组:以50 μmol/L的PQ和10 ng/mL的DKK1同时处理细胞72 h.收集细胞,采用细胞免疫荧光和Western Blot分别检测三组细胞转分化标记物α-SMA、Vimentin和Co
【机 构】
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南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)急诊医学科,南京 210002
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目的 探讨抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯(paraquat,PQ)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)转分化的影响及相关分子机制.方法 将MRC-5细胞分为三组,对照组(Control组):不加药物处理;PQ组:以50 μ mol/L的PQ刺激MRC-5细胞72 h诱导建立转分化模型;PQ+DKK1组:以50 μmol/L的PQ和10 ng/mL的DKK1同时处理细胞72 h.收集细胞,采用细胞免疫荧光和Western Blot分别检测三组细胞转分化标记物α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ的表达水平;同时,应用Western Blot、细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测转分化过程中Wnt通路相关信号分子β-catenin、Cyclin D1和WISP1的表达变化情况;进一步采用 Wnt/β-catenin 通路抑制剂 Dickkopf-1(DKK1)阻断该信号途径,Western Blot 检测 β-catenin、Cyclin D1和WISP1表达变化情况,以验证干预效果并分析干扰Wnt/β-catenin信号传递对转分化标记分子α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ表达的影响.结果 处理72h后,与对照组细胞相比,PQ组MRC-5细胞α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ的表达水平均显著增加(P＜0.05);同时,在PQ诱导MRC-5转分化过程中β-catenin、Cyclin D1和WISP1表达水平显著上调(P＜0.05);采用DKK1干扰Wnt/β-catenin信号通路能够抑制PQ诱导MRC-5细胞转分化过程中α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ的高表达(P＜0.05).结论 DKK1能够通过干扰Wnt/β-catenin信号的激活抑制PQ诱导的成纤维细胞转分化,有望进一步抑制PQ中毒引起的肺纤维化的发生.
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