【摘 要】
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目的研究脐带间充质干细胞(UCMSCs)向胶质瘤干细胞的趋化迁移功能及其内在机制。方法原代分离培养并鉴定UCMSCs，用软、硬琼脂糖凝胶培养基质联合胶质瘤干细胞维持因子[表皮生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]诱导胶质瘤干细胞限定在静息、增殖和分化状态，分别为软琼脂＋EGF+bFGF组、硬琼脂＋EGF+bFGF组、硬琼脂组，持续培养3组干细胞克隆球7 d并绘制克隆球直径生长曲线
【机 构】
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目的研究脐带间充质干细胞(UCMSCs)向胶质瘤干细胞的趋化迁移功能及其内在机制。
方法原代分离培养并鉴定UCMSCs，用软、硬琼脂糖凝胶培养基质联合胶质瘤干细胞维持因子[表皮生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]诱导胶质瘤干细胞限定在静息、增殖和分化状态，分别为软琼脂＋EGF+bFGF组、硬琼脂＋EGF+bFGF组、硬琼脂组，持续培养3组干细胞克隆球7 d并绘制克隆球直径生长曲线；培养72 h后流式细胞仪检测3组胶质瘤干细胞的细胞周期；免疫荧光染色检测3组胶质瘤干细胞克隆球CD133、增殖细胞相关的核抗原(Ki67)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达；Transwell实验检测UCMSCs向不同状态胶质瘤干细胞的迁移能力；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同状态胶质瘤干细胞培养液中干细胞因子(SCF)、基质衍生因子-1(SDF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达；用培养72 h的3组干细胞的条件培养液为培养基培养UCMSCs ，Western blotting检测UCMSCs中c-Kit、趋化因子受体-4(CXCR4)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)蛋白的表达。
结果培养2~7 d时硬琼脂＋EGF+bFGF组和硬琼脂组胶质瘤干细胞克隆球直径大于软琼脂＋EGF+bFGF组，差异有统计学意义(P<0.05)；细胞周期检测显示软琼脂+ EGF+bFGF组、硬琼脂＋EGF+bFGF组、硬琼脂组胶质瘤干细胞分别限定在静息、增殖和分化状态；软琼脂＋EGF+bFGF组胶质瘤干细胞克隆球高表达CD133[(95.79±5 .31)%]，硬琼脂＋EGF+bFGF组细胞克隆球高表达Ki67[(89.39±7.45)%]、GFAP[(63.49±16.54)%]；硬琼脂组细胞克隆球高表达GFAP[(97.36±3.48)%]；Transwell实验显示硬琼脂＋EGF+bFGF组细胞迁移百分率高于软琼脂+ EGF+bFGF组、硬琼脂组，差异有统计学意义(P<0.05)；硬琼脂＋EGF+bFGF组条件培养液中SCF、SDF-1和VEGF蛋白的含量高于软琼脂＋EGF+bFGF组和硬琼脂组，差异均有统计学意义(P<0.05) ；UCMSCs培养于硬琼脂+EGF+bFGF组条件培养液中时c-Kit、CXCR4和VEGFR蛋白表达水平均高于软琼脂＋EGF+bFGF组和硬琼脂组，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论UCMSCs向静息状态下的胶质瘤干细胞存在靶向迁移功能缺陷，SCF/c-Kit、SDF-1/CXCR4和VEGF/VEGFR轴表达缺陷可能是其潜在的内在机制。
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