【摘 要】
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目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白.方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化.将Cbfa1
【机 构】
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北京大学第三医院运动医学研究所,皖南医学院弋矶山医院骨科,北京大学医学部生物化学与分子生物学系
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目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白.方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化.将Cbfa1/Runx2 cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2.经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测.通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达.结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍.在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化.酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功.Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%.转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达.结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白.
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