TGF-β1/CTGF信号转导通路在百草枯中毒致MRC5细胞损伤中的作用

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目的

观察百草枯(PQ)染毒对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的影响,探讨PQ中毒致肺纤维化中转化生长因子β1(TGF-β1)/结缔组织生长因子(CTGF)信号转导通路的作用。

方法

体外培养MRC-5细胞,用终浓度0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0 μmol/L PQ处理细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活率。用终浓度为0、25.0、50.0、100.0 μmol/L PQ染毒细胞24 h,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞TGF-β1蛋白表达水平。为了观察PQ染毒对TGF-β1/CTGF信号通路的影响,将MRC-5细胞分为正常对照组、25、50、100 μmol/L PQ染毒组、TGF-β1阳性对照组(50 μmol/L重组人TGF-β1;rhTGF-β1)、TGF-β1刺激组(100 μmol/L PQ+50 μmol/L TGF-β1),免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Smad 2/3(p-Smad 2/3)、CTGF蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测CTGF mRNA表达水平。

结果

与对照组比较,MRC-5细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量-反应关系。ELISA显示,与对照组比较,25.0、50.0、100.0 μmol/LPQ染毒组TGF-β1蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但诱导作用呈非剂量-反应关系。Western blot显示,与对照组比较,25.0、50.0、100.0 μmol/L PQ染毒组p-Smad2、p-Smad3蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1刺激组p-Smad2、p-Smad3蛋白量达到最多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR显示,各剂量PQ染毒组CTGF mRNA表达明显升高,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05);共同刺激组的CTGF mRNA表达较正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,50.0、100.0 μmol/L PQ染毒组和TGF-β1刺激组的CTGF蛋白明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1刺激组的CTGF蛋白表达量最高。

结论

TGF-β1/Smad信号通路激活,调控下游靶基因CTGF介导TGF-β1的促纤维化效应,在PQ致肺纤维化中发挥重要作用。

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