【摘 要】
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[背景]鲍曼不动杆菌耐药严重,基因敲除是研究细菌毒力与耐药的重要方式.但现有的大部分细菌基因敲除方法基于抗生素抗性筛选,导致不适用于多重耐药菌株的基因敲除.[目的]旨在
【机 构】
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北京大学医学部基础医学院病原生物学系 北京 100191
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[背景]鲍曼不动杆菌耐药严重,基因敲除是研究细菌毒力与耐药的重要方式.但现有的大部分细菌基因敲除方法基于抗生素抗性筛选,导致不适用于多重耐药菌株的基因敲除.[目的]旨在建立一种非依赖于抗生素抗性筛选的方法,用于敲除多重耐药鲍曼不动杆菌基因.[方法]运用同源 重组和自杀载体pMo 130-TelR对亚碲酸钾的抗性,使用两步筛选法,构建鲍曼不动杆菌Ⅴ型分泌系统溶血素共调节蛋白(Hemolysin-Coregulated Protein,Hcp)基因敲除突变体,并对缺失株的生长能力、细菌竞争能力以及血清抵抗能力进行测试.[结果]通过构建合同源片段的重组pMo 130-TelR载体,成功敲除了鲍曼不动杆菌标准株ATCC 17978中的hcp基因,获得了ATCC 17978 hcp基因缺失突变体.突变体生长能力没有显著改变,但细菌竞争能力显著下降,血清抵抗能力显著升高.[结论]pMol30-TelR可成功用于鲍曼不动杆菌无痕基因敲除,对于研究鲍曼不动杆菌的耐药机制等相关问题具有深远意义.
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