【摘 要】
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目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)低表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡的影响.方法 采用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证微小RNA-124(miR-124)与HIPK3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)的靶向关系;将体外培养的原代海马神经元分为对照组(正常培养)、Aβ组(给予Aβ刺激)、Aβ+siSTAT3-NC组(转染siSTAT3-NC后给予Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3组(转染siHIPK3后给予Aβ刺激)、Aβ+siHIPK3+
【机 构】
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长沙市第一医院 神经内科,长沙 410005;长沙市第一医院 神经医学中心,长沙 410005
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目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)低表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡的影响.方法 采用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证微小RNA-124(miR-124)与HIPK3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)的靶向关系;将体外培养的原代海马神经元分为对照组(正常培养)、Aβ组(给予Aβ刺激)、Aβ+siSTAT3-NC组(转染siSTAT3-NC后给予Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3组(转染siHIPK3后给予Aβ刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-NC组(共转染siHIPK3和inhibitor-NC后给予Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-124组(共转染siHIPK3和miR-124 inhibitor后给予Aβ刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3-NC组(共转染siHIPK3、miR-124 inhibitor和siSTAT3-NC后给予Aβ刺激)和Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3组(共转染siHIPK3、miR-124 inhibitor和siSTAT3后给予Aβ 刺激).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HIPK3和miR-124表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测海马神经元存活率和凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.结果 生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验证实HIPK3可与miR-124靶向结合;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot实验证实,miR-124可靶向调控STAT3蛋白表达.与对照组比较,Aβ组海马神经元中HIPK3表达水平、STAT3蛋白表达水平、凋亡率和Caspase-3活性明显升高,而海马神经元存活率和miR-124表达水平明显降低(P<0.05);与Aβ+siHIPK3-NC组比较,Aβ+siHIPK3组中上述各指标明显逆转(P<0.05);与Aβ+siHIPK3+antimiR-NC组比较,Aβ+siHIPK3+antimiR-124组中各指标呈明显变化(P<0.05),且趋势与Aβ+siHIPK3组相反;与Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3-NC组比较,Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3组中各指标呈明显变化(P0.05).结论 CircHIPK3低表达可抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡,其作用机制与调控miR-124/STAT3轴有关.
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