【摘 要】
：
目的 构建人miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒载体,研究病毒感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的最适步骤和方法。方法 PCR技术扩增相应目的基因片段进行酶切,回收后与目的基因连接,
【机 构】
：
宁夏医科大学总医院生物芯片工程研究中心; 宁夏医科大学临床医学院;
【基金项目】
：
国家自然科学基金(NO:81560474,81860470);宁夏高等学校优秀青年培育项目(No:NGY2018-91);宁夏高等学校一流学科建设资助项目(No:NXYLXK2017A05)
论文部分内容阅读
目的 构建人miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒载体,研究病毒感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的最适步骤和方法。方法 PCR技术扩增相应目的基因片段进行酶切,回收后与目的基因连接,产物转化细菌感受态细胞,对阳性克隆测序比对分析,构建miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒载体,荧光法测定病毒滴定;在人乳腺癌细胞MDA-MB-231转染及筛选过程中,倒置显微镜观察转染效率,筛选最佳MOI值;Real-time PCR检测慢病毒转染后MDA-MB-231细胞内miR-18a-3P的表达。结果 测序分析证实重组慢病毒构建正确;过表达及干扰慢病毒的滴度分别为2×10~9TU/mL和1×10~9TU/mL;加Polybrene组较未加Polybrene组转染效率增高,且Polybrene浓度为1μg/mL时,转染效率最佳,获得人miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒表达载体转染MDA-MB-231细胞并测得最佳感染复数(multiply of infection,MOI)值为10MOI;Real-time PCR显示,较对照组和空载体组,过表达miR-18a-3P的MDA-MB-231细胞系中miR-18a-3P的表达量增加(P<0.05),干扰表达miR-18a-3P的MDA-MB-231细胞系中miR-18a-3P的表达量降低(P<0.05)。结论 成功构建了miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒表达载体,对人乳腺癌细胞MDA-MB-231进行转染和筛选后,可快速高效率获得所需目的细胞。
其他文献
薄弱学校教师不快乐有社会、学校、家长、学生等多方面的原因,最主要的原因是教师自身。语文教师想在薄弱学校中快乐地工作和生活,就需要摆正心态,找准定位;深入学生当中,与
当前我国中小企业利润操纵的现象比较普遍,并且手段很多,从而导致企业资产不实、利润虚增或虚减、所有者权益不实等现象,既影响了国家的宏观经济决策,也给投资者带来了严重危
本研究以企业知识团队为研究对象,探讨企业知识团队中真诚型领导、员工心理资本、团队信任与团队绩效的关系。分析员工心理资本与团队信任在真诚型领导与团队绩效之间的中介
早在1954年,著名管理学者德鲁克说过顾客购买和消费的绝不是产品,而是价值。众所周知顾客价值理论无论是在理论界还是实践中都已日趋成熟,顾客价值是市场营销管理的一个重要
设计即生活。体验生活、内化为敏锐的设计直觉,是风景园林专业学习不可或缺的环节。记录了美国华盛顿大学风景园林系副教授伊安·罗伯森在华中科技大学的"风景园林设计初步"
玛格丽特·德拉布尔在其长篇小说《针眼》中运用了多种叙事话语,增加了小说语言的丰富性,通过不同的叙事距离实现了不同的叙事效果。既赋予了小说丰富的艺术形式,又有效地塑
<正>乙型脑炎,又称日本乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE),简称乙脑,是由日本乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种严重危害人畜健康的急性热性病毒性传染病。猪乙型脑炎主要以蚊子
<正>小编的话3～6岁是儿童进入小学的前夕。不仅是准备进入小学学习的关键期,也是儿童身心成长、发育的关键期,至关重要。这个年龄阶段,儿童身心成长、发育的状况如何,不仅关系
自2008年经济危机爆发以来,全球各经济体均受到了不同程度的冲击,欧美国家"再工业化"战略的实施,加之劳动力生产成本的相对上升、能源原材料价格的不断上涨、对产品标准日趋
<正>每当第40交响曲的主题乐句一响起,我就情不自禁地为莫扎特感伤。它如一阵阵轻风,带来的是聪颖的莫扎特内心的忧郁。像是作者远远地透过灰色的窗,看到了外面明媚的春光,和