【摘 要】
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目的探讨小鼠移植心脏组织中穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-L mRNA以及活性Caspase 3的表达和水平变化,以了解它们在急性排斥反应心肌细胞凋亡中的作用和相互关系.方法利用反转录
【机 构】
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中山大学第二附属医院心胸外科,广州,510120
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目的探讨小鼠移植心脏组织中穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-L mRNA以及活性Caspase 3的表达和水平变化,以了解它们在急性排斥反应心肌细胞凋亡中的作用和相互关系.方法利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、Western免疫印迹(Western Blot)等检测方法,检测了与凋亡发生机理有关的穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-LmRNA及活性Caspase 3蛋白的表达和变化.同时,通过组织学分析和TDT介导的原位末端标志(TUNEL)等检测方法,分析了小鼠心脏移植模型急性排斥反应时组织损伤和细胞凋亡的情况.结果Fas在同基因组和异基因组中均有表达,且水平无差异.但Fas-L、穿孔素、粒酶B及Caspase 3只在异基因小鼠心脏移植中出现,术后第1天都开始表达,术后3 d、5 d强烈上调,与组织损伤、细胞凋亡呈直接相关.当使用Caspase抑制剂后,Caspase 3活性随之明显降低(P＜0.01),相应地组织损伤和细胞凋亡指数(AI)也明显减轻(P＜0.01).但其穿孔素、粒酶B、Fas-L却无变化.结论小鼠心脏移植急性排斥反应过程中存在心肌细胞的凋亡,是其损伤的重要机制;FasL、穿孔素、粒酶B以及活化Caspase 3的出现和上调程度与凋亡细胞的数量与急性排斥反应的严重程度直接相关;由细胞毒T淋巴细胞引发的Fas/FasL、粒酶B/穿孔素两种途径介导的细胞凋亡,都必须经过Caspase 3的活化这一共同通道来完成.
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