桃成花基因PpLFY的克隆与表达及多克隆抗体制备

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以‘八月脆’桃成花诱导期腋芽为试材,克隆得到一个FLORICAULA/LEAFY同源基因,命名为PpLEAFY(PpLFY),GenBank登录号为EF175869。该基因cDNA全长1314bp,开放阅读框为1248bp,编码一个含416个氨基酸残基的蛋白,与其他物种中的LEAFY蛋白的同源性较高(74.22%~84.69%)。组织及时期特异性表达分析表明,PpLFY主要在叶片、花瓣及成花诱导期及花芽形态分化初期表达。构建了pGEX-4T-1/PpLFY原核表达系统,获得了可溶性融合蛋白rPpLFY,分子量约为36kD。利用该蛋白免疫新西兰大白兔,获得了抗rPpLFY的多克隆抗体,ELISA效价为1∶10000。ZhengLi-xia,LinXiao-dong,ZhuFang-de,XiaoJie-ning,FuTong-hao,ZhongWei,HuangShang-zhi.2004.CloningofLFY/FLOhomologousgenecDNAfragmentinLongan(DimocarpuslonganLour.).JournalofSunyat-senUniveristy:NaturalScienceEdition,43:60-64.(inChinese)郑丽霞,林晓东,朱芳德,肖洁凝,符同浩,钟伟,黄上志.2004.龙眼FLO/LFY同源基因cDNA片段的克隆.中山大学学报:自然科学版,43:60-64. A FLORICAULA / LEAFY homologous gene named PpLEAFY (PpLFY) was cloned using the axillary buds induced by ’August crisp’ peach blossom. The GenBank accession number was EF175869. The full-length cDNA of this gene is 1314bp in length and contains an open reading frame of 1248bp, encoding a 416 amino acid residue protein with high homology (74.22% -84.69%) to other LEAFY proteins. Tissue and period-specific expression analysis showed that PpLFY was mainly expressed in leaves, petals, flower bud induction and early flower bud differentiation. The prokaryotic expression system pGEX-4T-1 / PpLFY was constructed and the soluble fusion protein rPpLFY was obtained. The molecular weight was about 36kD. The protein was used to immunize New Zealand white rabbits to obtain polyclonal antibodies against rPpLFY. The ELISA titer was 1:10000. ZhengLi-xia, LinXiao-dong, ZhuFang-de, XiaoJie-ning, FuTong-hao, ZhongWei, HuangShang-zhi.2004.CloningofLFY / FLOhomologousgenecDNAfragmentinLongan (Dimocarpus longanLour.) Journal of Sunyat-senUniveristy: Natural ScienceEdition, 43: 60-64. 2004-04 Cloning of cDNA Fragment of FLO / LFY Homologous Gene from Longan. Journal of Sun Yatsen University: Natural Science, 43: 60-64.
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