本生烟脂质转移蛋白基因克隆及VIGS沉默载体和过量表达载体构建

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非特异性脂质转移蛋白(non-specific lipid transfer proteins,nsLTPs)是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白,具有多种生物学功能.为研究nsLTPs在调控植物应答生物与非生物胁迫的反应中起的作用,本研究以本生烟(Nicotiana benthamiana)为材料,成功克隆非特异脂质转移蛋白NbLTP1全长基因,其开放阅读框序列为360 bp,编码119个氨基酸,分子重量为12.44kD,为疏水性蛋白,等电点为7.45.对NbLTP1蛋白质三级结构进行了预测和分析,并进一步构建了烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的病毒诱导的基因沉默载体TRV∶NbLTP1.荧光定量PCR结果表明通过VIGS可以显著抑制NbLTP1基因的表达.此外还通过In-Fusion克隆技术快速成功构建了pCAMBIA 1305-NbLTP1-3*HA过量表达载体.本研究为下一步遗传转化、后续研究NbLTP1调控植物防御生物与非生物胁迫的分子机理、培育新种质提供理论依据.
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