【摘 要】
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目的:通过体外实验评估双硫仑(disulfiram,DSF)对人胰腺癌细胞增殖、细胞周期的影响并初步探讨可能作用机制.方法:不同浓度梯度的DSF联合Cu(DSF/Cu)处理人胰腺癌PANC-1和PATU
【机 构】
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南京医科大学国家卫生健康委抗体技术重点实验室,江苏南京211166;南京医科大学附属肿瘤医院头颈外科,江苏南京210009
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目的:通过体外实验评估双硫仑(disulfiram,DSF)对人胰腺癌细胞增殖、细胞周期的影响并初步探讨可能作用机制.方法:不同浓度梯度的DSF联合Cu(DSF/Cu)处理人胰腺癌PANC-1和PATU8988T细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性及药物对细胞的增殖抑制率;选取IC50浓度的DSF/Cu处理细胞,流式细胞术检测细胞周期分布情况,并采用荧光定量PCR和Westernblot法检测各组细胞中生长阻滞和DNA损伤诱生基因45A(growth arrest and DNA damage inducible 45A,GADD45A),G2/M周期特异性蛋白CCNB1、CDC25C、CDK1的转录和翻译水平,同时检测MAPK通路相关蛋白P38和JNK蛋白磷酸化水平;siRNA干扰试验检测抑制GADD45A基因后细胞相对活力、细胞周期及MAPK通路相关蛋白磷酸化水平的变化.结果:DSF联合Cu对人胰腺癌细胞增殖具有明显抑制作用,且抑制率随DSF浓度增加而增加.DSF/Cu可明显上调GADD45A基因的表达,诱导细胞周期G2/M期阻滞,抑制G2/M周期特异性基因及蛋白的表达;Real-time PCR结果表明DSF/Cu处理PANC-1细胞和PATU8988T细胞24 h后GADD45A表达量升高,分别为对照组的11.4和7.99倍(P均＜0.001);相应地,PANC-1细胞和PATU8988T细胞CCNB1、CDC25C、CDK1表达量下降,分别为对照组的31％、35％和37％(P均＜0.05)及48％、24％和29％(P均＜0.05),差异有统计学意义.Western blot结果与RNA表达结果相对应,且呈浓度和时间依赖趋势.同时,MAPK信号通路相关蛋白磷酸化水平增高.siRNA-GADD45A干扰后细胞活力增加,G2/M细胞比例降低,MAPK信号通路磷酸化水平降低.结论:DSF/Cu可通过上调GADD45A并激活JNK/P38-MAPK信号通路诱导细胞周期G2/M阻滞,进而引起细胞增殖抑制,发挥抗肿瘤作用.
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