目的制备南定病毒(NDi V)标准血清,建立ELISA检测方法,为在人群中监测南定病毒感染状况提供方法。方法用南定病毒感染3周龄SPF级BALB/c小鼠,分别在0、7、14 d以腹腔注射的方式免疫SPF级6~8周龄BALB/c小鼠,免疫血清用IFA法进行鉴定;南定病毒感染C6/36细胞,制备ELISA抗原,确定酶结合物、抗原和标准阳性血清的最佳工作浓度,建立南定病毒ELISA检测方法,进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验。结果制备南定病毒免疫血清,以IFA测定血清效价为1:320,与呼吸道合胞病毒、腺病毒均无交叉反应;建立了ELISA检测方法,确立了各种试剂的最佳工作浓度,其中酶结合物最佳工作浓度为1:10 000,抗原为2.3μg/ml,阳性参考血清为1:200;ELISA检测灵敏度为1:3 200。板内特异抗原、正常抗原平均变异系数为4.56%和5.17%,板间为3.38%和6.64%。稳定性实验相对偏差均小于20%。结论本研究制备的南定病毒免疫血清可作为血清学检测方法中的标准质控血清;建立的ELISA方法重复性、稳定性好,敏感性和特异性强,可用于南定病毒血清抗体检测。