目的 利用携带HCV复制子的Huh 7.5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达和肝细胞葡萄糖代谢的影响.方法 应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧(ROS)变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+/还原型NDA(NADH)比值变化,应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法检测SIRT1活性、mRNA和蛋白的表达,应用放射核素法和葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率和糖异生,RT-PCR检测SLRT1 下游调节糖代谢基因mRNA水平.计量资料比较采用t检验.结果 与Huh 7.5细胞相比,复制子细胞ROS水平升高(3.8±0.5比1.0±0.2,t=12.736,P＜0.01),NAD+/NADH比值下降(0.03±0.01比0.12±0.03,t＝6.971,P＜0.01),SIRT1活性(0.3±0.1比1.0±0.2,t＝7.668,P＜0.01)、mRNA(0.4±0.1比1.0±0.3,t=4.648,P＜0.01)和蛋白(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.941,P＜0.01)水平下降.SIRT1受抑后,不仅增加胰岛素受体底物-1(IRS-1)磷酸化(0.7±0.2比0.4±0.1,t=3.286,P＜0.01),降低蛋白激酶B(Akt)磷酸化(0.3±0.1比0.6±0.2,t=3.286,P＜0.01),下调葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)基因表达(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P＜0.01),抑制葡萄糖摄取率(每分钟计数值:4600±500比21 000±4600,t=8.682,P＜0.01)；而且降低叉头蛋白转录因子O1 (FoxO1)磷酸化(0.2±0.1比0.5±0.1,t=5.196,P＜0.01),上调磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(2.8±0.6比1.0±0.3,t=6.573,P＜0.01)和葡萄糖-6-磷酸酶(2.6±0.5比1.0±0.2,t＝7.278,P＜0.01)基因表达,增加糖异生(2.5±0.5比1.0±0.2,t=5.543,P＜0.01).结论 HCV复制降低NAD+/NADH比值,下调SIRT1活性和表达,改变其下游调节糖代谢相关基因表达,降低葡萄糖摄取能力,增加糖异生,导致肝细胞葡萄糖代谢紊乱,促进HCV复制。
沉默信息调节因子1活性受抑导致肝细胞糖代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制
【摘 要】
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目的 利用携带HCV复制子的Huh 7.5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达和肝细胞葡萄糖代谢的影响.方法 应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧(ROS)变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+/还原型NDA(NADH)比值变化,应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法检测SIRT1活性、mRNA和蛋白的表达,应用放射核素法和葡萄糖氧
【机 构】
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150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,1500
【出 处】
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中华传染病杂志
【发表日期】
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2013年31期
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