【摘 要】
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目的:为快速检测虾产品中的活副溶血性弧菌,建立一种实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescent saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)与叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)染料相结合的检测方法.方法:依据副溶血性弧菌的特异性基因toxR设计并筛选引物,对PMA-RF-SRCA检测方法进行特异性、灵敏度及检出限分析,并与PMA-实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain
【机 构】
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河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000;河北农业大学理工学院,河北沧州 061100;河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000;河北农业大学理工学院,河北沧州 061100;河北农业
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目的:为快速检测虾产品中的活副溶血性弧菌,建立一种实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescent saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)与叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)染料相结合的检测方法.方法:依据副溶血性弧菌的特异性基因toxR设计并筛选引物,对PMA-RF-SRCA检测方法进行特异性、灵敏度及检出限分析,并与PMA-实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法进行对比.对76份样品进行检测,以GB 4789.7-2013方法为标准,对PMA-RF-SRCA方法的相对敏感性、相对特异性、相对符合率进行计算,以对本方法的实用性进行评估.结果:此方法的引物特异性良好,12株副溶血性弧菌结果均呈阳性,18株非副溶血性弧菌结果均呈阴性;PMA-RF-SRCA法灵敏度为3.2×100 CFU/mL,检出限为2.08×101 CFU/g,此方法的灵敏度是PMA-real-time PCR的100倍.经过实际样品检测,PMA-RF-SRCA方法的敏感性、特异性、符合率分别为100.00％、96.00％和98.68％.结论:PMA-RF-SRCA方法特异性强、灵敏度高,可用于虾产品中的活副溶血性弧菌的检测与筛查.
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