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目的:脑胶质瘤是颅内致死性最高的原发性恶性肿瘤。目前的治疗方案体系是手术、化疗、放疗和分子靶向治疗的综合体系。药物高效快速地进入脑肿瘤组织是提高化疗疗效的关键,血肿瘤屏障（Blood tumor barrier,BTB）是一种由肿瘤组织中的三种微血管亚群组成的结构,BTB的存在会大大降低药物的通过率,降低化疗的疗效。因此如何选择性增加BTB通透性,使药物尽可能的通过BTB,将成为一种更有效的胶质瘤综合治疗策略之一。piRNAs是一种（Piwi-interacting RNA）是一类长度约为2432 nt（nucleotides）的非编码RNA。在所有的非编码RNA中,piRNAs数量最多。piRNAs通过与PIWI蛋白相互作用发挥生物学功能。近期研究发现PIWI/piRNA与肿瘤等疾病的发生发展密切相关,可以在基因蛋白质调控、表观遗传调控、转座子沉默等过程中发挥重要作用,piRNAs可能成为未来肿瘤诊治的生物标志物。piRNA-DQ590027（hsapiR014633）的功能研究尚无报道。长链非编码RNAs（long noncoding RNA,lncRNAs）是一类参与调控细胞内多种生物过程且长度在200-100000nt之间的不编码蛋白的非编码RNA。在基因表达转录以及转录后水平都发挥重要调控作用。相关研究报道显示,部分特定的lncRNAs在肿瘤细胞内会发生表达水平的异常改变,lncRNAs可能作为未来治疗肿瘤疾病的的潜在药物靶点以及新的诊断标志物。MIR17HG是编码miR-17-92基因簇宿主基因,研究表明MIR17HG参与多种肿瘤的调控,但是对脑胶质瘤内皮细胞功能的作用尚未见报道。本研究首先探讨piRNA-DQ590027和lncRNA-MIR17HG在人脑胶质瘤微血管内皮细胞中的表达及功能,同时进一步探讨上述因子调控脑胶质瘤血管内皮细胞的可能作用机制,阐述对BTB通透性的调控作用,为未来胶质瘤的综合治疗提供新思路。研究方法:1.建立体外BTB模型;2.实时荧光定量PCR法检测piR-DQ590027、MIR17HG、miR-153、miR-377、FOXR2的表达水平;3.Western bolt检测FOXR2、ZO-1、occludin、claudin-5表达水平;4.免疫荧光染色实验检测ZO-1、occludin、claudin-5;5.在GECs中分别沉默MIR17HG、过表达FOXR2、沉默FOXR2,构建稳定的MIR17HG沉默、FOXR2过表达和沉默的转染细胞系以及在GECs中分别瞬时转染agomir-153和antagomir-153,agomir-377和antagomir-377;6.TEER实验检测BTB完整性;7.HRP渗出量实验检测BTB通透性;8.双荧光素酶报告基因实验验证piR-DQ590027与MIR17HG、MIR17HG与miR-153、MIR17HG与miR-377、miR-153与FOXR2、miR-377与FOXR2的靶向作用及靶向位点;9.RNA结合蛋白免疫共沉淀实验（RIP）检测MIR17HG、miR-153和miR-377与Ago2的靶向结合作用;10.应用ChIP实验技术验证FOXR2分别与ZO-1、occludin、claudin-5启动子区的靶向结合作用;11.流式细胞检测技术检测血肿瘤屏障的应用情况。结果:1.piR-DQ590027在GECs中低表达,过表达piR-DQ590027显著降低了TEER值、增加HRP的渗出率;同时显著抑制GECs紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的表达,并改变了紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs细胞膜上的分布,由相对连续分布变成了不连续分布;沉默piR-DQ590027显著增加了TEER值、降低HRP的渗出率;同时可以显著增强紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs中的表达,并使紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在细胞膜上的分布增加。2.MIR17HG在GECs中高表达,沉默MIR17HG显著降低了TEER值、增加了HRP的渗出率;同时显著抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的表达,并使细胞膜上紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的分布由相对连续状态变成了不连续状态。3.在GECs中过表达piR-DQ590027,显著降低了MIR17HG的表达。同时,piR-DQ590027与MIR17HG靶向结合。4.在MIR17HG表达沉默的GECs中分别过表达和沉默piR-DQ590027,过表达piR-DQ590027后显著降低了TEER值,增加了HRP的渗出率,同时显著抑制脑紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的表达;沉默piR-DQ590027后显著抑制了MIR17HG对TEER值的抑制作用以及对HRP的促进作用,同时显著抑制了沉默MIR17HG后对紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5表达的抑制作用。5.miR-153在GECs中低表达,过表达miR-153可以显著降低TEER值、增加HRP的渗出率,同时能显著抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs中的蛋白表达,并改变紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs上的分布,使其在细胞膜边缘由相对连续分布状态变成不连续分布状态;沉默miR-153显著增加了TEER值、降低了HRP的渗出率,同时显著增强了紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的蛋白表达。6.miR-377在GECs中低表达,过表达miR-377可以显著降低TEER值、增加HRP的渗出率,同时能显著抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs中的蛋白表达,并改变紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs上的分布,使其在细胞膜边缘由相对连续分布状态变成不连续分布状态;沉默miR-377显著增加了TEER值、降低了HRP的渗出率,同时显著增强了紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的蛋白表达。7.在GECs中沉默MIR17HG的表达,显著增加miR-153、miR-377的表达。同时,MIR17HG与miR-153、miR-377靶向结合,并分别与miR-153、miR-377共同富集于Ago2复合物中。8.在表达沉默的MIR17HG GECs中分别过表达miR-153、miR-377,能显著增加沉默MIR17HG之后对TEER值的抑制、以及对HRP的促进作用;同时显著增加了沉默MIR17HG之后对GECs紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达的抑制作用。与此相反,在表达沉默的MIR17HG GECs中分别沉默miR-153、miR-377,能对之前发挥逆转作用。9.FOXR2在GECs中高表达,过表达FOXR2可以显著增加TEER值和降低HRP的渗出率,沉默FOXR2的表达显著降低TEER值同时增加HRP渗出量;同时沉默FOXR2后可以显著抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达,并改变紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs上的分布,使其在细胞膜边缘由相对连续分布状态变成不连续分布状态;过表达FOXR2后可以增强紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达。10.FOXR2靶向结合ZO-1、occludin和caludin-5的启动子区。11.miR-153、miR-377分别靶向结合FOXR2。并且,在GECs中分别过表达miR-153、miR-377可以显著抑制FOXR2的蛋白表达。12.同时双过表达FOXR2和miR-153,能够显著改变在GECs中单独过表达miR-153对降低TEER值、增加HRP渗出率的作用,同时可以显著逆转过表达miR-153抑制脑内紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5表达的作用。13.同时双过表达FOXR2和miR-377,能够显著改变在GECs中单独过表达miR-377对降低TEER值、增加HRP渗出率的作用,同时可以显著逆转过表达miR-377抑制脑内紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5表达的作用。14.在沉默MIR17HG GECs中分别过表达piR-DQ590027、miR-153、miR-377的体外BTB模型以及同时双过表达miR-153、miR-377的体外BTB模型中均能够增加阿霉素促进胶质瘤细胞的凋亡作用。结论:1.piR-DQ590027通过结合MIR17HG,MIR17HG通过结合miR-153、miR-377调节BTB通透性。2.miR-153和miR-377分别通过靶向结合FOXR2的3’-UTR,共同调节BTB通透性。3.FOXR2促进紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的转录,上调其表达,调节BTB通透性。4.piR-DQ590027/MIR17HG/miR-137、miR-377/FOXR2信号轴在调节BTB通透性中发挥重要作用。