【摘 要】
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目的 比较WAR-5与盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,并探究其作用机制.方法 采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35 55多肽(MOG35 55)免疫雌性C5
【机 构】
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030001,山西医科大学第一临床医学院037009,山西大同大学脑科学研究所;030024,山西中医学院“2011”协同创新中心/神经生物学研究中心;200025,复旦大学华山医院神经病学研究所;
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目的 比较WAR-5与盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,并探究其作用机制.方法 采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35 55多肽(MOG35 55)免疫雌性C57BL/6小鼠建立慢性EAE模型,并随机分为EAE对照组、WAR-5治疗组和Fasudil治疗组.于免疫后第3天开始,分别腹腔注射WAR 5、Fasudil及生理盐水,比较各组小鼠体质量变化和临床评分.于免疫后第28天处死各组动物,制作脊髓冰冻切片进行CD4-T细胞、CD68+巨噬细胞及核转录因子-κB(p-NF-κB/p65)染色,观察其在脊髓中的表达.提取脑组织的蛋白用Western blot法检测Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)Ⅱ和p-NF-κB/p65蛋白表达,并采用Griess法检测脾细胞培养上清液的一氧化氮(NO)释放水平.结果 与EAE对照组(108.70±20.26、399.00±25.94)比较,WAR-5治疗组(13.67±4.041、52.67±13.43)及Fasudil治疗组(15.33±5.033、31.00±13.45)脊髓内CD4+T细胞和CD68+巨噬细胞数目均减少(均P＜0.01),WAR-5与Fasudil两治疗组相比,差异无统计学意义.与EAE对照组(1.9500±0.3976、0.5885±0.05982)比较,WAR-5组(0.6137±0.1778、0.0096±0.0015)及Fasudil组(1.1960±0.2225、0.3574±0.1496)脑内ROCKⅡ、p NF-κB/p65表达均降低,WAR-5治疗组脑内ROCKⅡ、p NFκB/p65表达亦均低于Fasudil治疗组(均P＜0.05).WAR-5和Fasudil治疗组上清液NO含量分别为(16.40±0.5247)μmol/L、(17.69±0.2833)μmol/L,均低于EAE对照组[(20.07±0.6116)μmol/L;均P＜0.001],且WAR-5治疗组低于Fasudil治疗组(P＜0.01).与Fasudil治疗组比较,800 μg及1600 μg药物注射后,WAR 5治疗组小鼠的存活状态明显较好;800 μg药物注射后,WAR 5治疗组小鼠的脚趾无明显血管扩张反应.结论 WAR 5对EAE的治疗效果与Fasudil相近,且其治疗安全性较好,扩张血管作用较小,其作用机制可能与WAR-5抑制小鼠ROCKⅡ的表达及抑制炎性反应相关.
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