中国麋鹿朊蛋白核心片段的原核克隆表达与纯化

来源 :中国动物检疫 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xgdiban

【摘要】

：

从采取的新鲜麋鹿血液中提取麋鹿基因组DNA，通过PCR的方法从麋鹿基因组中扩增麋鹿PrP蛋白核心片段的DNA，并分别在引物的5′和3′端引入EcoRⅠ和HindⅢ两个酶切位点，下游引物将原

【作者】

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刘玉亮刘雨田胡国良郭小泉孙成友

【机构】

：

中国动物卫生与流行病学中心,江西农业大学

【出处】

：

中国动物检疫

【发表日期】

：

2010年11期

【关键词】

：

PrP蛋白酶切转化诱导纯化 protein PrP enzyme digestion transform induce purify

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从采取的新鲜麋鹿血液中提取麋鹿基因组DNA，通过PCR的方法从麋鹿基因组中扩增麋鹿PrP蛋白核心片段的DNA，并分别在引物的5′和3′端引入EcoRⅠ和HindⅢ两个酶切位点，下游引物将原序列TATTAC突变为TAAT从变成两个终止密码子。通过两个酶切位点将麋鹿PrP蛋白核心片段DNA连接到pET-32a（＋），转化DH5α，通过酶切鉴定和PCR鉴定，筛选出阳性克隆送菌液测序，从测序结果分析阳性克隆是否符合要求。测序正确后将核心片段基因连接到pET-32a（＋），阳性质粒命名为MPrP-pET-32a（＋

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