论文部分内容阅读
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-MALAT1在人腹膜间皮细胞(HPMCs)高糖损伤导致的腹膜纤维化中的作用。方法将永生化的HPMCs分为对照组及高糖(50 mmol/L葡萄糖)刺激1、3、5、7 d组,使用实时荧光定量PCR及Western印迹方法,检测MALAT1、表型转换及纤维化相关分子E-钙黏素(E-cad)、ɑ-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)、胶原蛋白I(ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)、纤连蛋白(Fn)、结缔组织生长因子(CTGF)在mRNA及蛋白水平的表达变化;给予HPMCs转染MALAT1的过表达慢病毒,检测MALAT1、表型转换及纤维化相关分子E-cad、ɑ-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF在mRNA及蛋白水平的表达变化;给予高糖刺激72 h后的HPMCs转染MALAT1siRNA,再检测以上成分的mRNA及蛋白水平的表达变化。采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析。结果高糖刺激HPMCs后,随时间的延长,MALAT1及间质标志分子ɑ-SMA、纤维化相关分子ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF的表达明显增加与对照组比较差异有统计学意义(mRNA水平MALAT1、α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF第7天时分别为t=7.080、t=6.325、t=7.205、t=11.70、t=5.739、t=9.221,P<0.05;蛋白水平α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF第7天时分别为t=3.429、t=3.846、t=5.274、t=3.751、t=4.093,P<0.05),上皮标志分子E-cad mRNA及蛋白水平表达逐渐下降(第7天时mRNA t=7.270、P=0.0019,蛋白水平t=5.658、P=0.0048);慢病毒转染使MALAT1上调后,MALAT1、ɑ-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF的表达增加(mRNA水平MALAT1α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF分别为t=7.151、t=6.495、t=6.068、t=8.660、t=5.283、t=3.230,P<0.05;蛋白水平α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF分别为t=3.980、t=3.623、t=3.351、t=4.965、t=5.804,P<0.05),E-cad表达下降(mRNA水平t=5.511,P=0.0053;蛋白水平t=6.397,P=0.0031);使用siRNA下调MALAT1后,MALAT1、ɑ-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF的表达下降(mRNA水平MALAT1、ɑ-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF分别为t=2.854、t=5.511、t=3.442、t=2.442、t=4.407、t=6.556,P<0.05;蛋白水平ɑ-SMA、ColⅠ、ColⅢ、Fn、CTGF分别为t=3.241、t=7.589、t=7.427、t=4.319、t=3.976,P<0.05),E-cad表达增加(mRNA水平t=2.865、P=0.0457;蛋白水平t=2.823、P=0.0477)。结论MALAT1参与高糖刺激所引起的HPMCs的纤维化过程,并且可以促进腹膜纤维化的发生。