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鸡新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,发病急、传播快、死亡率高,发病率可达90%。临床上常见呼吸困难,排水样或黄绿色粪便,产蛋鸡产蛋量急剧下降,软壳蛋、畸形蛋明显增多。鸡只接种新城疫疫苗后体内会产生特异性抗体,借助间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA),可对血清中新城疫抗体水平进行检测,有效评估鸡群的免疫效果。为摸清汾阳市散养鸡新城疫抗体水平,笔者于2013年5月对汾阳市3个乡镇散养鸡新城疫抗体进行了血清学检测,现报告如下:
一、材料与方法
1. 血样的采集
对汾阳市3个养殖集中乡镇散养鸡随机采血,每只翅下静脉采血2毫升,共采集血样178份,其中冀村75份,杏花46份,阳城57份。
2. 血样的处理
采集的血样倾斜静置1小时,待析出血清后,2000转/分钟离心8~10分钟,取上层血清待检。
3. 仪器与试剂
单道、多道微量移液器;吸头;D-9602酶标分析仪,北京普朗新技术有限公司生产;新城疫病毒抗体检测试剂盒,北京维德维康生物技术有限公司生产,批号为121202。
4. 试验方法与原理
①试验方法。间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)。
②原理。特异的NDV被包被在96孔平底聚苯乙烯板上。在反应过程中,检测样本被加入反应孔中,样本中的特异性抗体会与孔中包被的特异性抗原反应,在洗板的过程中不会被清洗掉,当添加酶标复合物时,这些酶标复合物就会与鸡血清的抗体发生反应。没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。再加入底物显色,显色的深浅与样本所含NDV的抗体浓度成正比。
③操作步骤。第一步样本稀释,将被检血清用稀释液做1∶100稀释。第二步加样,阴性血清和阳性血清各占1孔做对照,其余孔加1∶100稀释的被检血清,每孔100微升,加样位置做好记录,反应板盖上膜,置37℃环境下作用30分钟后洗涤3次。第三步加酶标抗体,每孔加酶标抗体液100微升,反应板盖上膜,置37℃环境下作用30分钟后洗涤3次。第四步加底物使用液,每孔100微升,置室温避光显色2~3分钟。第五步加终止液,每孔100微升,使其终止反应。
④结果判定。在酶标仪490纳米波长处,测定酶标板的每孔吸光值(P),除以同板标准阴性对照的吸光值(N),测得每份被检样品的P/N值。P/N≥2.5时,样品判定为阳性;P/N<2.5时,样品判定为阴性;N≥0.3时,结果不准确,必须查找原因,重新测定。
二、结果分析
178份待检血清吸光值见表1、表2。H11孔为阴性血清吸光值,H12孔为阳性血清吸光值。冀村75份血清对应孔为表1的A行、B行、C行、D行、E行、F行和G1~G3;杏花46份血清对应孔为表1的G4~G12与H1~H10和表2的A行、B行、C1~C3;阳城57份血清对应孔为表2的C4~C12、D行、E行、F行、G行。冀村合格数62份,合格率82.7%;杏花合格数27份,合格率58.7%;阳城合格数51份,合格率89.5%。总的合格数140份,合格率78.7%,见表3。
三、讨论
我市要求新城疫免疫密度达到100%,从本次检测结果来看,冀村、阳城的新城疫免疫合格率达到了农业部的要求(70%以上),但值得注意的是杏花镇的新城疫合格率(58.7%)远低于农业部标准。笔者通过调查了解,分析主要原因如下:
1. 疫苗保存不当。部分养殖户为图省事,将油乳剂灭活苗、冻干苗都放在4℃冷藏箱中,导致冻干苗因储存温度过高而失效。
2. 饲养条件和饲料质量差。一些农村散养户的鸡舍通风不良、卫生条件差,鸡群长期处于应激状态,免疫力下降。有的饲料黄曲霉素超标、营养物质缺乏,影响新城疫抗体产生。
3. 防疫员责任心亟待加强。有的防疫员在接种疫苗时没有按照规定剂量免疫,有的过分追求防疫进度而忽视效果,有的嫌注射疫苗麻烦,而采用饮水免疫,这都造成新城疫抗体水平低下,必须加强防疫员的责任心。
(作者联系地址:山西省汾阳市动物疫病预防控制中心 邮编:032200)
一、材料与方法
1. 血样的采集
对汾阳市3个养殖集中乡镇散养鸡随机采血,每只翅下静脉采血2毫升,共采集血样178份,其中冀村75份,杏花46份,阳城57份。
2. 血样的处理
采集的血样倾斜静置1小时,待析出血清后,2000转/分钟离心8~10分钟,取上层血清待检。
3. 仪器与试剂
单道、多道微量移液器;吸头;D-9602酶标分析仪,北京普朗新技术有限公司生产;新城疫病毒抗体检测试剂盒,北京维德维康生物技术有限公司生产,批号为121202。
4. 试验方法与原理
①试验方法。间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)。
②原理。特异的NDV被包被在96孔平底聚苯乙烯板上。在反应过程中,检测样本被加入反应孔中,样本中的特异性抗体会与孔中包被的特异性抗原反应,在洗板的过程中不会被清洗掉,当添加酶标复合物时,这些酶标复合物就会与鸡血清的抗体发生反应。没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。再加入底物显色,显色的深浅与样本所含NDV的抗体浓度成正比。
③操作步骤。第一步样本稀释,将被检血清用稀释液做1∶100稀释。第二步加样,阴性血清和阳性血清各占1孔做对照,其余孔加1∶100稀释的被检血清,每孔100微升,加样位置做好记录,反应板盖上膜,置37℃环境下作用30分钟后洗涤3次。第三步加酶标抗体,每孔加酶标抗体液100微升,反应板盖上膜,置37℃环境下作用30分钟后洗涤3次。第四步加底物使用液,每孔100微升,置室温避光显色2~3分钟。第五步加终止液,每孔100微升,使其终止反应。
④结果判定。在酶标仪490纳米波长处,测定酶标板的每孔吸光值(P),除以同板标准阴性对照的吸光值(N),测得每份被检样品的P/N值。P/N≥2.5时,样品判定为阳性;P/N<2.5时,样品判定为阴性;N≥0.3时,结果不准确,必须查找原因,重新测定。
二、结果分析
178份待检血清吸光值见表1、表2。H11孔为阴性血清吸光值,H12孔为阳性血清吸光值。冀村75份血清对应孔为表1的A行、B行、C行、D行、E行、F行和G1~G3;杏花46份血清对应孔为表1的G4~G12与H1~H10和表2的A行、B行、C1~C3;阳城57份血清对应孔为表2的C4~C12、D行、E行、F行、G行。冀村合格数62份,合格率82.7%;杏花合格数27份,合格率58.7%;阳城合格数51份,合格率89.5%。总的合格数140份,合格率78.7%,见表3。
三、讨论
我市要求新城疫免疫密度达到100%,从本次检测结果来看,冀村、阳城的新城疫免疫合格率达到了农业部的要求(70%以上),但值得注意的是杏花镇的新城疫合格率(58.7%)远低于农业部标准。笔者通过调查了解,分析主要原因如下:
1. 疫苗保存不当。部分养殖户为图省事,将油乳剂灭活苗、冻干苗都放在4℃冷藏箱中,导致冻干苗因储存温度过高而失效。
2. 饲养条件和饲料质量差。一些农村散养户的鸡舍通风不良、卫生条件差,鸡群长期处于应激状态,免疫力下降。有的饲料黄曲霉素超标、营养物质缺乏,影响新城疫抗体产生。
3. 防疫员责任心亟待加强。有的防疫员在接种疫苗时没有按照规定剂量免疫,有的过分追求防疫进度而忽视效果,有的嫌注射疫苗麻烦,而采用饮水免疫,这都造成新城疫抗体水平低下,必须加强防疫员的责任心。
(作者联系地址:山西省汾阳市动物疫病预防控制中心 邮编:032200)