【摘 要】
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目的 研究低氧/HIF-1α通路对RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化的调控作用,并初步探讨其可能的分子机制.方法 采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒感染法,分别建立H
【机 构】
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陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院骨科,重庆,400037;
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目的 研究低氧/HIF-1α通路对RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化的调控作用,并初步探讨其可能的分子机制.方法 采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒感染法,分别建立HIF-1α和NRP-1稳定低表达的RAW264.7细胞系.将RAW264.7细胞分组培养:对照组,分化组(RANKL 100 ng/mL+50％成骨细胞CM),缺氧组(RANKL 100 ng/mL+50％成骨细胞CM+ 100 μmol/LCoC12氯化钴),缺氧+HIF-1α-NC组,缺氧+HIF-1α-shRNA干扰组,缺氧+NRP-1-NC组及缺氧+NRP-1-shRNA干扰组.TRAP染色观察破骨细胞的分化情况;RT-PCR检测Cath K、MMP-9、TRAP、HIF-1α和NRP-I mRNA的表达;Weste blot检测HIF-1α和NRP-1蛋白的表达.结果 ①缺氧组破骨细胞分化相关基因Cath K、MMP-9、TRAP mRNA的表达量及TRAP染色阳性细胞数均明显低于分化组(P＜0.05).②缺氧组细胞中HIF-1α和NRP-1的表达均明显高于分化组(P＜0.05).③与缺氧组相比,缺氧+HIF-1α-shRNA干扰组TRAP染色阳性细胞数及破骨细胞分化相关基因的表达均明显增加(P＜0.05);且HIF-1α和NRP-1表达均明显减少(P＜0.05).④与缺氧组相比,缺氧+NRP-1-shRNA干扰组TRAP染色阳性细胞数及破骨细胞分化相关基因的表达均明显增加(P＜0.05);且NRP-1表达明显减少(P＜0.05).结论 在RAW264.7细胞中,CoGl2诱导的缺氧能够通过上调HIF-1α增强NRP-1的表达,从而抑制其向成熟破骨细胞分化.
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