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目的
构建肺癌放射抗性细胞系,观察细胞在形态、凋亡、侵袭迁移能力和上皮间质转化的改变。
方法采用小剂量等分割照射法、亚致死剂量照射法及梯度递增照射法筛选肺癌A549和H1299放射抗性细胞系,显微镜下观察细胞形态学改变,克隆形成实验检测放射敏感性,CCK-8法检测细胞受照后存活率;流式细胞仪检测凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的变化;蛋白印迹法检测上皮间质转化标志蛋白表达。
结果梯度递增照射法构建肺癌放射抗性细胞系可行性好,得到放射抗性细胞A549R和H1299R,形态学观察示放射抗性细胞向间质细胞形态转变。分别以A549和H1299细胞为对照,A549R和H1299R细胞D0、Dq、SF2增加(P=0.017和0.033、0.001和0.000、0.000和0.008),α和α/β值减少(P=0.018和0.001、0.007和0.009)。A549R和H1299R细胞在不同照射剂量下存活率均大于对照组(P值均<0.05),受照后凋亡率降低(P=0.02和0.01),侵袭率及迁徙率增高(P=0.000和0.001及0.001和0.002),E-钙黏蛋白表达下调和波形蛋白表达增高(P=0.00和0.01及P=0.02和0.01)。
结论成功构建肺癌放射抗性细胞系,其侵袭迁移能力增强,并且可能与上皮间质转化有关系。