X染色质标本制作方法的改进

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  【摘要】为提高制作X染色质标本的质量,对原有的方法进行了改进。新方法将口腔黏膜细胞直接涮入固定液中,以滴片法制片,自来水流水冲洗玻片,用甲苯胺蓝染色,取得了良好的实验效果。
  【关键词】X染色质,制作方法,改进
  【中图分类号】R361+2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2014)07-0086-01
  Abstract:
  Keywords:
  X染色質是女性间期细胞核膜内侧边缘轮廓清楚的浓染小体,大小约为1μm,一般呈平凸、圆形、扁平或三角形[1]。制作X染色质标本相对于染色体的制备来说更简单易行,在鉴定性别及染色体数目异常疾病的诊断中发挥着重要作用。根据标本制作的效果,针对传统制片方法中存在的一些问题,对实验方法进行了一些改进,现总结如下。
  1固定的新方法
   让受检者漱口后刮取口腔黏膜细胞数次,将刮取物直接涮入装有固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)的离心管内,固定15min。原方法将刮取物先涮入生理盐水中,离心去上清液后再添加固定液固定,导致细胞丢失较多,离心次数多较费时。改进后的方法可以减少离心次数,减少细胞丢失,结果更准确。
  2制片的新方法
   用滴片的方法取代原来的涂片法。直接涂片法[2]可以保留较多细胞,但存在涂抹不均匀,细胞重叠聚集或过度分散,并且涂抹物中杂质多,影响X染色质的准确鉴别。离心后的细胞悬液滴片,杂质少,滴片时易于控制细胞密度,实验效果好。
  3冲洗的新方法
   玻片置于自来水下流水冲洗,将玻片上的盐酸彻底冲洗干净,以免影响染色;染色后的玻片也置于自来水流水冲掉片上多余的染液。原来的方法是置于蒸馏水中涮洗,如果制作大量的标本,多次反复使用同一染缸中的蒸馏水,易造成涮洗不干净,标本间相互干扰大。改用自来水流水冲洗,各标本独立清洗,避免彼此影响。自来水价格较蒸馏水低,也可节约成本。
  4染色的新方法
   以甲苯胺蓝代替硫堇染色。以02%甲苯胺蓝作为染液,染色10min,染色效果好。甲苯胺蓝染液配制方法简单,硫堇染液配制步骤繁琐;甲苯胺蓝染色效果易于控制,硫堇染液易残留在玻片上,不易冲洗干净,造成背景较脏[3]。
   用改进后的方法制备X染色质,细胞分布均匀,背景中的杂质少,细胞核着色清晰,X染色质阳性率高,实验效果好,为X染色质的进一步研究提供了基础。
  参考文献
  [1]王修海等. 医学遗传学实验指导[M].科学出版社,2001:32.
  [2]李石旺,卢新华,许名宗. 人类X染色质标本制备实验方法的改进[J].解剖学杂志,2005,28(2):240-241.
  [3]纪静.两种染色方法对X染色质显示效果的比较[J].青岛大学医学院学报,2003,39(3):354-355.
  (收稿日期:20140223)
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