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摘要：抗生素和激素的广泛应用以及有创诊疗技术的发展，致使血液感染发病率逐渐升高，菌血症是由致病菌侵入血液后所致的一种感染状态，而菌血症治疗时间长，费用多，病死率高，危害极大，血培养是血液感染诊断的金标准，但培养时间长，即使阴性也不能除外感染，淋巴细胞亚群作为机体免疫功能的一个重要指标，在病原菌感染后，会发生一系列数量和比例的变化。本研究选择107例血培养患者，分析其外周血淋巴细胞亚群数量的变化，找出其规律，为临床对菌血症的辅助诊断、治疗提供理论依据。
【中图分类号】R552 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）03-294-02
1.资料与方法
1.1.资料：本次研究选取2018年10月至2019年11月在本院住院同时进行血培养阳性及外周血淋巴细胞亚群测定的患者107例，男68例，女39例，年龄18-70岁，平均年龄44±22岁，送检血培养与淋巴细胞亚群送检时间不超过24小时，并选同期健康体检人员36例作为健康对照组，男21例，女15例，平均年龄43±19岁。
1.2分组：按细菌生长情况分为革兰氏阴性细菌感染组（82例）、革兰氏阳性细菌感染组（25例），同时设健康对照组（36例）。
1.2.方法：
1.2.1试剂与仪器：美国BD公司BACTEC9120全自动血培养仪及BD公司配套血培养瓶，美国BD公司PHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏系统及原装配套试剂，美国贝克曼公司FC-500流式细胞分析仪，稀释液（COULTER ISOTON Ⅲ DILUENT），清洗液（COULTER CLENZ），四色复合试剂异硫氰酸盐荧光素（FITC） 标记的CD45、藻红蛋白（PE）标记的CD4、藻红蛋白-得克萨斯红（ECD）标记的CD8、藻青蛋白5（PC5）标记的CD3。双色复合试剂FITC标记的CD3、PE标记的CD（16/56）。单色试剂PC5标记的CD19，藻青蛋白7（PC7）标记的CD45。
1.2.2血培养：静脉采血16-20ml立即注入厌氧菌和需氧菌培养瓶各1瓶，每瓶8-10ml，并送实验室，实验室接受标本编号、登记后，将血培养瓶置BD公司BACTEC9120全自动血培养仪中培养;当仪器阳性报警时，用无菌注射器抽取培养液涂片、革兰氏染色、镜检，根据染色镜检结果接种营养血平板和/或巧克力平板，置于37℃孵育24h，待菌落形成后挑取单个菌落配成0.5个麦氏单位菌液置BD公司PHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏系统对病原菌鉴定，另取菌落涂片、革兰氏染色、镜检确认。
1.2.3.淋巴细胞亚群检测：静脉采集外周血2 ml加入EDTA-K2抗凝管中。 取两管分别标记T、B&NK，分别加入抗凝血100ul，T系四色荧光素抗体20ul加入T管;CD45、 CD19、CD3单色荧光素抗体，CD16/56 单色荧光素双抗体各20ul加入B&NK管。两管轻轻混匀，避光染色15min后，均再加入500ul裂解液混匀，避光10min取出，300g离心5min，弃去上清液，加2ml0.01MPBS液洗涤，离心弃去上清液，再加入0.5ml0.01MPBS混匀，上流式细胞仪分别检测总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、CD8淋巴细胞、4/8比值、B淋巴细胞、NK细胞百分含量。
1.3.统计学分析：采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计数资料以表示，组间比较采用t检验分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
本次107例患者血培养阳性结果中，革兰氏阴性菌感染组患者总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8、B淋巴细胞百分含量较健康对照组明显升高（P<0.05）。革兰氏阳性菌感染组总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8比值与对照组比较有统计学意义（p<0.05）。与革兰氏菌阳性组比较，革兰氏阴性菌总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8比值有统计学意义（P<0.05）组见附表。
3.讨论
淋巴细胞是机体免疫反应中主要作用细胞。机体在正常情况下，各淋巴细胞亚群保持一定的数量和比例，协同调节，实现机体免疫功能正常运行。而当病原微生物侵入机体时，免疫应答会使淋巴细胞亚群的数量或功能发生变化，导致机体免疫功能失调。外周血中总T淋巴细胞，其表面的CD3分子参与T淋巴细胞识别抗原，介导机体的细胞免疫应答反应。T4淋巴细胞也称诱导/辅助性T淋巴细胞，具有辅助B淋巴细胞产生淋巴因子，增强和扩大免疫应答。
T8淋巴细胞包括抑制性/细胞毒性细胞，具有直接杀伤感染微生物的靶细胞的功能。4/8比值是监测人体细胞免疫功能，反应机体免疫状态的主要指标，用于评价免疫失调、免疫状态、以及免疫系统的损害程度。B淋巴细胞表达和分泌免疫球蛋白，执行体液免疫以清除病原微生物。NK细胞属自然杀伤细胞，具有抗感染、免疫调节等功能。
本研究中，革兰氏阴性组和革兰氏阳性组总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8比值较健康对照组明显升高，说明菌血症患者在病原菌侵入血液后，机体免疫功能失调，动态平衡紊乱，细胞免疫功能反应性增强。革兰氏阴性细菌感染组患者总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8、B淋巴细胞百分含量较健康对照组明显升高，表示机体感染革兰氏阴性菌后，以细胞免疫为代表的CD4细胞异常活化，反应性增殖，介导体液免疫的B淋巴细胞功能亢进，说明机体此时细胞免疫和体液免疫同时对非己抗原诱发的免疫应答，在对抗病原菌过程发挥重要的调节作用。革兰氏阳性细菌感染组中T4淋巴细胞、4/8比值均高于对照组，但增高幅度不及革兰氏阴性组，两组比较有统计学意义，说明机体此时以细胞免疫为主，但免疫反应革兰氏阴性菌组强于革兰氏阳性菌组，考虑为革兰氏阳性菌组以葡萄球菌为主，革兰氏阳性组以杆菌为主，球菌对机体刺激反应弱于杆菌，这也可能与病例少有关系，是本研究的不足之处，还有待在后续工作中进一步的研究改进提高。
在淋巴细胞亚群检测中影响因素众多，如机体的營养状况，维生素和微量元素水平、体质等，[2-5]但是在血培养患者中由于淋巴细胞亚群的异常活化，导致了免疫功能的紊乱，在临床治疗过程中，应加强免疫功能调节，适度使用免疫调节剂（如糖皮质激素、免疫球蛋白、匹多莫德等）进行治疗，尽快平衡患者的淋巴细胞亚群比例，有助于促进病情恢复，缩短病程，减少并发症。
参考文献
[1]World Health Organization，Prevention of hospital-acquired infections：a practical guide[M].2nd ed.Geneva：World Health Organization，2002
[2]蒋利平，杨锡强，李成荣等.儿童血清免疫球蛋白G亚类缺陷及其与反复呼吸道感染的关系[J].中华儿科杂志，1990.28（2）：79-81
[3]Singh M.Recurrent lower respiratory tract infections in children[J].Indian I Pediatr，1999，66（6）：887-893
[4]赵黎光，马凯，反复呼吸道感染与微量元素的关系[J].中国医药导报，2006，3（18）：62
[5]Brook I，Shah K.Bacteriology of adenoids and tonsils in children with recurrent adenotonsillitis[j].Ann Otol Rhinol Laryngol，2001，110（9）：844-848.
山西省阳泉市第一人民医院检验科 045000
【中图分类号】R552 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）03-294-02
1.资料与方法
1.1.资料：本次研究选取2018年10月至2019年11月在本院住院同时进行血培养阳性及外周血淋巴细胞亚群测定的患者107例，男68例，女39例，年龄18-70岁，平均年龄44±22岁，送检血培养与淋巴细胞亚群送检时间不超过24小时，并选同期健康体检人员36例作为健康对照组，男21例，女15例，平均年龄43±19岁。
1.2分组：按细菌生长情况分为革兰氏阴性细菌感染组（82例）、革兰氏阳性细菌感染组（25例），同时设健康对照组（36例）。
1.2.方法：
1.2.1试剂与仪器：美国BD公司BACTEC9120全自动血培养仪及BD公司配套血培养瓶，美国BD公司PHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏系统及原装配套试剂，美国贝克曼公司FC-500流式细胞分析仪，稀释液（COULTER ISOTON Ⅲ DILUENT），清洗液（COULTER CLENZ），四色复合试剂异硫氰酸盐荧光素（FITC） 标记的CD45、藻红蛋白（PE）标记的CD4、藻红蛋白-得克萨斯红（ECD）标记的CD8、藻青蛋白5（PC5）标记的CD3。双色复合试剂FITC标记的CD3、PE标记的CD（16/56）。单色试剂PC5标记的CD19，藻青蛋白7（PC7）标记的CD45。
1.2.2血培养：静脉采血16-20ml立即注入厌氧菌和需氧菌培养瓶各1瓶，每瓶8-10ml，并送实验室，实验室接受标本编号、登记后，将血培养瓶置BD公司BACTEC9120全自动血培养仪中培养;当仪器阳性报警时，用无菌注射器抽取培养液涂片、革兰氏染色、镜检，根据染色镜检结果接种营养血平板和/或巧克力平板，置于37℃孵育24h，待菌落形成后挑取单个菌落配成0.5个麦氏单位菌液置BD公司PHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏系统对病原菌鉴定，另取菌落涂片、革兰氏染色、镜检确认。
1.2.3.淋巴细胞亚群检测：静脉采集外周血2 ml加入EDTA-K2抗凝管中。 取两管分别标记T、B&NK，分别加入抗凝血100ul，T系四色荧光素抗体20ul加入T管;CD45、 CD19、CD3单色荧光素抗体，CD16/56 单色荧光素双抗体各20ul加入B&NK管。两管轻轻混匀，避光染色15min后，均再加入500ul裂解液混匀，避光10min取出，300g离心5min，弃去上清液，加2ml0.01MPBS液洗涤，离心弃去上清液，再加入0.5ml0.01MPBS混匀，上流式细胞仪分别检测总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、CD8淋巴细胞、4/8比值、B淋巴细胞、NK细胞百分含量。
1.3.统计学分析：采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计数资料以表示，组间比较采用t检验分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
本次107例患者血培养阳性结果中，革兰氏阴性菌感染组患者总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8、B淋巴细胞百分含量较健康对照组明显升高（P<0.05）。革兰氏阳性菌感染组总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8比值与对照组比较有统计学意义（p<0.05）。与革兰氏菌阳性组比较，革兰氏阴性菌总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8比值有统计学意义（P<0.05）组见附表。
3.讨论
淋巴细胞是机体免疫反应中主要作用细胞。机体在正常情况下，各淋巴细胞亚群保持一定的数量和比例，协同调节，实现机体免疫功能正常运行。而当病原微生物侵入机体时，免疫应答会使淋巴细胞亚群的数量或功能发生变化，导致机体免疫功能失调。外周血中总T淋巴细胞，其表面的CD3分子参与T淋巴细胞识别抗原，介导机体的细胞免疫应答反应。T4淋巴细胞也称诱导/辅助性T淋巴细胞，具有辅助B淋巴细胞产生淋巴因子，增强和扩大免疫应答。
T8淋巴细胞包括抑制性/细胞毒性细胞，具有直接杀伤感染微生物的靶细胞的功能。4/8比值是监测人体细胞免疫功能，反应机体免疫状态的主要指标，用于评价免疫失调、免疫状态、以及免疫系统的损害程度。B淋巴细胞表达和分泌免疫球蛋白，执行体液免疫以清除病原微生物。NK细胞属自然杀伤细胞，具有抗感染、免疫调节等功能。
本研究中，革兰氏阴性组和革兰氏阳性组总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8比值较健康对照组明显升高，说明菌血症患者在病原菌侵入血液后，机体免疫功能失调，动态平衡紊乱，细胞免疫功能反应性增强。革兰氏阴性细菌感染组患者总T淋巴细胞、CD4淋巴细胞、4/8、B淋巴细胞百分含量较健康对照组明显升高，表示机体感染革兰氏阴性菌后，以细胞免疫为代表的CD4细胞异常活化，反应性增殖，介导体液免疫的B淋巴细胞功能亢进，说明机体此时细胞免疫和体液免疫同时对非己抗原诱发的免疫应答，在对抗病原菌过程发挥重要的调节作用。革兰氏阳性细菌感染组中T4淋巴细胞、4/8比值均高于对照组，但增高幅度不及革兰氏阴性组，两组比较有统计学意义，说明机体此时以细胞免疫为主，但免疫反应革兰氏阴性菌组强于革兰氏阳性菌组，考虑为革兰氏阳性菌组以葡萄球菌为主，革兰氏阳性组以杆菌为主，球菌对机体刺激反应弱于杆菌，这也可能与病例少有关系，是本研究的不足之处，还有待在后续工作中进一步的研究改进提高。
在淋巴细胞亚群检测中影响因素众多，如机体的營养状况，维生素和微量元素水平、体质等，[2-5]但是在血培养患者中由于淋巴细胞亚群的异常活化，导致了免疫功能的紊乱，在临床治疗过程中，应加强免疫功能调节，适度使用免疫调节剂（如糖皮质激素、免疫球蛋白、匹多莫德等）进行治疗，尽快平衡患者的淋巴细胞亚群比例，有助于促进病情恢复，缩短病程，减少并发症。
参考文献
[1]World Health Organization，Prevention of hospital-acquired infections：a practical guide[M].2nd ed.Geneva：World Health Organization，2002
[2]蒋利平，杨锡强，李成荣等.儿童血清免疫球蛋白G亚类缺陷及其与反复呼吸道感染的关系[J].中华儿科杂志，1990.28（2）：79-81
[3]Singh M.Recurrent lower respiratory tract infections in children[J].Indian I Pediatr，1999，66（6）：887-893
[4]赵黎光，马凯，反复呼吸道感染与微量元素的关系[J].中国医药导报，2006，3（18）：62
[5]Brook I，Shah K.Bacteriology of adenoids and tonsils in children with recurrent adenotonsillitis[j].Ann Otol Rhinol Laryngol，2001，110（9）：844-848.
山西省阳泉市第一人民医院检验科 045000