【摘 要】
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为建立一种检测鸽源鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）抗体的间接ELISA方法，将Cps的主要外膜蛋白（Major outer membrane protein，MOMP）基因分别克隆至2个原核表达载体，获得了2种带有不同标签的重组蛋白MOMP-GST和MOMP-His，利用MOMP-His重组蛋白免疫制备多克隆抗体，MOMP-GST重组蛋白经抗MOMP的兔源多抗验证后作为
【基金项目】
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河北省“三三三人才工程”项目（A20221003）； 校企合作项目（3109120001）；
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为建立一种检测鸽源鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）抗体的间接ELISA方法，将Cps的主要外膜蛋白（Major outer membrane protein，MOMP）基因分别克隆至2个原核表达载体，获得了2种带有不同标签的重组蛋白MOMP-GST和MOMP-His，利用MOMP-His重组蛋白免疫制备多克隆抗体，MOMP-GST重组蛋白经抗MOMP的兔源多抗验证后作为包被抗原，经条件优化，建立基于鸽源Cps的MOMP蛋白的间接ELISA方法。结果显示，成功表达了大小约为51 ku的MOMP-His和65 ku的MOMP-GST重组蛋白，制备的抗MOMP兔源多克隆抗体效价在1︰409 600以上。该ELISA方法的最适条件为：抗原包被质量浓度为0.5 mg/L，血清稀释度为1︰200，抗原包被液为CBS，抗原包被条件为37 ℃ 1 h，封闭液为50 mL/L FBS；封闭条件为37 ℃ 2 h，血清孵育时间为30 min，酶标二抗稀释度为1︰8000，酶标二抗孵育时间为1 h，底物反应时间为5 min。特异性试验结果显示，该方法仅能检测鸽源Cps阳性血清，与鸽Ⅰ型副黏病毒等其他常见鸽病毒阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果显示，当鸽阳性血清稀释到1︰1600时检测结果仍为阳性，且批内批间的重复变异系数均在6%以内。结果表明，本研究建立的检测Cps的MOMP抗体的间接ELISA方法特异性强、敏感性高和重复性好，且可用于鸽Cps疫苗免疫抗体水平检测与流行病学调查。
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