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目的
观察中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液对人真皮成纤维细胞增殖、老化及自噬的影响。
方法取健康青少年男子环切术后包皮进行人真皮成纤维细胞的分离培养。将中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞设为实验组，并设立对照组即正常成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞。处理20 d后，用CCK8法检测细胞增殖活性，EDU （5-乙炔基-2，脱氧尿嘧啶核苷）法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期，β半乳糖苷酶染色计算衰老细胞百分比，吖啶橙染色检测细胞自噬，Western印迹法及间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3-B的表达水平。数据采用Graphpad Prism 5软件分析，两组间比较采用成组t检验。
结果实验组成纤维细胞增殖活力（0.831 ± 0.017）明显低于对照组（0.973 ± 0.017），但EDU染色及流式细胞仪检测结果均显示，实验组S期细胞百分比明显高于对照组，差异均有统计学意义（P< 0.05）。β半乳糖苷酶染色显示，实验组成纤维细胞阳性率（25.710% ± 0.304%）高于对照组（5.257% ± 1.023%），差异有统计学意义（t=19.170, P< 0.05）。吖啶橙染色结果显示，实验组成纤维细胞红色荧光量（14.287 ± 2.269）低于对照组（29.614 ± 2.650）。Western印迹及间接免疫荧光结果均显示，实验组成纤维细胞LC3-B表达量明显高于对照组，差异均有统计学意义（P< 0.05）。
结论中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞的条件培养液可降低成纤维细胞的自噬及增殖，并加速其老化。