【摘 要】
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目的探讨促红细胞生成素(EPO)新靶点的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体构建策略。方法设计合成3个EPO siRNA片段，与含有绿色荧光蛋白和卡那霉素抗性的质粒载体连接，转化到JM109大肠埃希菌感受态细胞中，采用碱基序列测序方法鉴定其构建情况。在人脑神经胶质瘤U251细胞株中，转染成功构建的3个EPO siRNA真核表达载体，采用倒置荧光显微镜，观察U251细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果①
【机 构】
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010050 呼和浩特市，内蒙古医科大学附属医院检验科,010050 呼和浩特市，内蒙古医科大学附属医院检验科
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目的探讨促红细胞生成素(EPO)新靶点的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体构建策略。
方法设计合成3个EPO siRNA片段，与含有绿色荧光蛋白和卡那霉素抗性的质粒载体连接，转化到JM109大肠埃希菌感受态细胞中，采用碱基序列测序方法鉴定其构建情况。在人脑神经胶质瘤U251细胞株中，转染成功构建的3个EPO siRNA真核表达载体，采用倒置荧光显微镜，观察U251细胞绿色荧光蛋白表达情况。
结果①本研究成功构建了新靶点EPO siRNA真核表达载体，即PEPO-1、PEPO-2与PEPO-3，并且构建的3个EPO siRNA真核表达载体序列，与所设计的标准序列完全相同，未发现任何突变、缺失、插入等基因异常情况。②本研究成功将3个EPO siRNA真核表达载体PEPO-1、PEPO-2与PEPO-3转染至人脑神经胶质瘤U251细胞内，并且所有转染PEPO-1、PEPO-2与PEPO-3的U251细胞均表达绿色荧光蛋白。
结论本研究成功构建新靶点EPO siRNA真核表达载体，并将其转染于人脑神经胶质瘤细胞中，为EPO在贫血等疾病中的作用机制研究奠定了实验基础。
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