【摘 要】
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参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒（atypical porcine pestivirus virus,APPV）全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到
【机 构】
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吉林农业大学动物科学技术学院; 军事科学院军事兽医研究所; 温州大学病毒学研究所; 广西壮族自治区疾病预防控制中心;
【基金项目】
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国家重点研发计划资助项目(2017YFD0501803,2017YFD0500101)
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参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒（atypical porcine pestivirus virus,APPV）全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法。结果显示,建立的荧光定量PCR方法Ct值与标准品在1.49×101～1.49×1010 copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207%。该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2%。对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高。本试验所建立的APPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测。
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