【摘 要】
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目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对中波紫外线(UVB)应激性衰老成纤维细胞(UVB-SIPS-FB)的氧化损伤和凋亡作用.方法 正常成纤维细胞及UVB-SIPS-FB均分为2h和6h孵育组,
【机 构】
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210029,南京医科大学第一附属医院皮肤性病科
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目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对中波紫外线(UVB)应激性衰老成纤维细胞(UVB-SIPS-FB)的氧化损伤和凋亡作用.方法 正常成纤维细胞及UVB-SIPS-FB均分为2h和6h孵育组,每组内再分为7组:对照组、ALA组、100 J/cm2照光组、3组不同红光照射剂量ALA-PDT处理组(25 J/cm2组、50 J/cm2组、100 J/cm2组)及抗氧化剂NAC+ 50 J/cm2红光照射ALA-PDT处理组.采用635 nm红光(能量密度50 mW/cm2)照射处理后,使用荧光显微镜、流式细胞仪检测各组细胞中活性氧及线粒体膜电位水平;Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率.数据用SPSS 13.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析,结合q检验.结果 孵育2h,25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率(分别为7.34％±0.87％、8.39％±1.16％、17.03％±1.29％)较对照组(3.81％±0.59％)上升(F=102.70,均P＜0.05),NAC+ 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率(5.35％±0.58％)下降(P＜0.05);孵育6h,25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率(分别为13.85％±1.71％、23.40％±2.14％、41.02％±2.73％)较对照组(5.09％±1.64％)显著上升(F=106.00,均P＜0.05),NAC+50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率(9.97％±3.23％)显著下降(P＜0.05).单纯ALA组或照光组UVB-SIPS-FB凋亡率与对照组差异均无统计学意义.ALA-PDT处理组细胞活性氧荧光强度显著上升,线粒体去极化增强,这些现象与ALA孵育时间及红光照射剂量均呈量效依赖性关系.使用抗氧化剂NAC预处理可以减少ALA-PDT诱导的活性氧增多及线粒体去极化增强,与凋亡率变化一致.结论 ALA-PDT可诱导UVB-SIPS-FB出现明显的细胞凋亡,其作用机制可能与ALA-PDT对细胞的氧化损伤有关.
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