麻疹H基因克隆及表达条件优化

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目的克隆麻疹H蛋白基因,构建重组表达质粒,诱导表达蛋白。方法麻疹Edmonston株减毒活疫苗中提取基因组RNA,RT-PCR扩增H基因。用限制性内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切H蛋白基因片段和pET30a(+)载体,连接后获得重组质粒MV—H-pET30a(4-),转化至BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果RT-PCR扩增片段长度约为1900bp,与MV-H基因相符。MV-H—pET30a(4-)测序结果显示:MV-H基因对码正确,核苷酸序列符合率达99.7%。SDS—PAGE结果表明,菌体中含
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