探讨脂肪来源间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSC)对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠辅助性T细胞(Th)、调节性T细胞(Treg)的调节作用及其机制。
方法取Balb/c小鼠60只,采用随机数字表法随机分为6组(分组表示为:致敏/激发/处理),分别为实验组1(OVA/OVA/高剂量ADSC)、实验组2(OVA/OVA/低剂量ADSC)、实验组3(OVA/OVA/磷酸盐缓冲液PBS)、实验组4(OVA/OVA/ 0)、对照组1(PBS/PBS/ 0)和对照组2(0/ 0/ 0)。常规分离提取小鼠ADSC,卵清蛋白(ovalbumin,OVA)联合氢氧化铝构建AR小鼠模型,尾静脉注射CM-Dil标记的ADSC(高剂量组:3×106;低剂量组:1×106)连续3 d,48 h后处死,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中白细胞介素(interleukin,IL)4、IL-6、IL-10和γ干扰素(γ interferon,IFN-γ)的水平,反转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测脾脏中上述各细胞因子mRNA的表达,荧光显微镜下观察ADSC在AR模型鼠鼻黏膜中的迁移分布,鼻黏膜HE染色观察嗜酸粒细胞浸润情况。以SPSS 13.0软件进行统计学处理。
结果成功分离培养并鉴定小鼠ADSC。AR模型小鼠症状学评分与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。实验组1与实验组4相比,血清IL-4、IL-6水平下调[组1:(17.95±7.78)、(27.51±5.93)pg/ml;组4:(56.82±9.12)、(70.03±7.22)pg/ml],IFN-γ、IL-10水平上调[组1:(367.74±13.79)、(417.10±72.40)pg/ml;组4:(199.46±11.25)、(122.50±15.57)pg/ml],差异均有统计学意义(P值均<0.01)。实验组1与实验组2相比,血清IL-4、IL-6水平下调[组1:(17.95±7.78)、(27.51±5.93)pg/ml;组2:(41.57±12.27)、(56.21±9.23)pg/ml],IFN-γ、IL-10水平上调[组1:(367.74±13.79)、(417.10±72.40)pg/ml;组2:(281.77±30.41)、(203.45±87.10)pg/ml],差异均有统计学意义(P值均<0.01)。上述4种细胞因子mRNA水平与蛋白质水平呈现相同的变化特点。荧光显微镜下CM-Dil标记的ADSC可向鼻黏膜迁移分布,实验组1较实验组2有更明显的红色荧光。实验组1和实验组2较实验组4鼻黏膜中嗜酸粒细胞浸润明显减少。
结论经静脉注入的ADSC可向AR模型小鼠鼻黏膜迁移,并发挥非特异性免疫调节效应。其机制可能是通过影响多种细胞因子的分泌进而调节Th1/Th2细胞免疫失衡和Treg细胞的功能而发挥作用,且在一定程度上与剂量相关。