探讨螺内酯对高糖环境下鼠肾小管上皮细胞衰老机制的干预作用。
方法将DMEM高糖培养基培养的鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为5组：高糖组(25.6 mmol/L，a组)，醛固酮组(10-5 mmol/L，b组)，醛固酮加不同剂量螺内酯干预组：低剂量螺内酯(10-7 mmol/L，c组)，中剂量螺内酯(10-6 mmol/L，d组)，高剂量螺内酯(10-5 mmol/L，e组)；去血清同步化24 h，分别给予上述干预后继续培养24、48、72 h，进行细胞衰老β-半乳糖酐酶检测。培养72 h的细胞给予提取RNA及蛋白质，分别进行Klotho、p53、p21、β-肌动蛋白(β-actin)荧光定量PCR的检测及相应的蛋白检测。多组间比较采用方差分析,两两比较采用q检验。
结果(1)72 h各组阳性衰老细胞构成比：a组(47.9±4.7)%，b组(49.0±5.2)%，c组(38.2±4.1)%，d组(39.7±3.8)%，e组(42.1±3.9)%；χ2=45.850，均P<0.001，24、48 h不同剂量的螺内酯组(c、d、e组)衰老细胞的构成比均低于a及b组。(2) 72 h各组细胞Klotho mRNA表达结果：与a组相比，b组Klotho mRNA表达明显下降(P<0.05)，a组1.13±0.09，b组0.85±0.02，c组1.42±0.11，d组1.37±0.08，e组1.14±0.06；F= 8.134，P<0.01)。(3) p53 mRNA表达结果：与a组相比，p53 mRNA表达明显升高(a组0.62±0.13，b组0.93±0.15，c组0.45±0.06，d组0.51±0.09，e组0.61±0.09;F= 9.629，P<0.05)。(4)p21 mRNA表达结果:与a组相比，p21 mRNA表达明显升高(a组0.74±0.06，b组1.05±0.05，c组0.42±0.02，d组0.61±0.07，e组0.72±0.03;F= 5.450，P<0.05)。与b组相比，c、d、e组Klotho mRNA与蛋白表达呈螺内酯剂量依赖性上升(P<0.05)，p53与p21则呈剂量依赖性下降(P< 0.05)。Klotho与p53、p21蛋白表达之间呈负相关(r=-0.744，r=-0.627，P<0.05)。
结论醛固酮增多可以加速高糖环境下肾小管上皮细胞衰老，而螺内酯可以干预衰老的发生，干预机制可能通过MR、Klotho、p53、p21信号通路。