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【摘要】目的 建立植物油中15种多环芳烃的中性氧化铝小柱固相萃取—高效液相色谱检测方法。 方法 植物油经正己烷溶解后过中性氧化铝固相萃取小柱净化， Waters PAH 4.6×250mm色谱柱进行分离，乙腈-水梯度洗脱，流速1.5ml/min，进样量10ul，柱温30，荧光检测器检测，外标法定量。结果 15种多环芳烃混合标准溶液在浓度为0.01-0.50ug/mL的范围内，在荧光检测器下呈良好的线性关系，该方法的检出限为0.1-1.5ug/kg之间，样品的加标回收率在62.14%-120.35%之间，RSD在0.91%-4.32%之间。结论 本实验所用方法具有样品前处理简单，检测方法高效快速，灵敏度高，准确性好等优点，能够满足植物油中多种多环芳烃含量的检测。
【关键词】多环芳烃；植物油；高效液相色谱法；食品安全
Abstract： Objective To establish a method for simultaneous determination of 15 PAHs in plant oil by SPE-HPLC.Methods The edible vegetable oil was dissolved in n-hexaneand，cleaned up with neutral alumina SPE cartridges. The 15 PAHs was carried out by waters-PAHs column （ 4. 6 mm ×250 mm） with a gradient elution using acetonitrile-water as mobile phase at a flow rate of 1. 5 ml /min，the column temperature was 30 ℃，and the injection volume was 10 μl. Detection was carried out by a fluorescence detector with external standard.Results The 15 PAHs solution was a good linear relationship at a concentration within a range of 0.01-0.50ug / mL， The LOD was in the range of 0. 1 ～ 1.5 μg /kg with average recovery ranging from 62.14% to 120.35%. The RSD was in the range of 0. 91% ～ 4.32 0%.Conclusions The method had the advantages of simple pretreatment，high sensitivity and accuracy，which could be applied to the determination of the 15 PAHs in plant oil.
Keywords： PAHs ；Edible vegetable oil ；HPLC；Food safety
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2016）05-0010-02
多环芳烃是一组由两个或两个以上苯环和稠环链接在一起的芳香族化合物及其衍生物，来源于工业生产、有机物热解或不完全燃烧等，为持久性有机污染物 [1]。环境中的PAH能通过生物转化[2，3]等多种途径到达食物链，参与机体的代谢作用。PAHs 对生育、发育、血液、心脏、神经及免疫系统等具 有毒性，能诱发多种癌症[4]。流行病学研究表明[5]，PAHs 通过皮肤、呼吸道、消化道等均可被人体吸收，有诱发皮肤癌、肺癌、直肠癌、膀胱癌等作用，人类对 PAHs 暴露的主要来源是通过饮食[6]。 植物油是饮食中多环芳烃的主要来源[7]。由于植物原料中 PAHs 的存在，生产过程中工艺、技术、设备条件的不足，以及在运输过程中受环境污染等原因，都可能导致食用油中最终含有一定量PAHs。因此建立植物油中多种PAHs同时测定的方法，监测植物油中多环芳烃的含量显得尤为重要。食用植物油基质复杂，PAHs种类繁多且大多含量较低，高效的提取净化浓缩方法是测定的关键。目前植物油中PAHs的检测方法主要有荧光分光光度法、GC/GC-MS法、高效液相色谱法，本研究通过查阅文献及其进行相关实验研究，建立了中性氧化铝固相萃取柱--高效液相色谱法测定植物油中15种多环芳烃的检测方法。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1样品
1.1.2 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪（waters e2695-2475），色谱柱Waters PAH 4.6×250mm，中性氧化铝固相萃取柱Cleanert BaP-SPE，快速混合器，氮吹仪；高频数控超声清洗器；旋转蒸发仪，电热恒温水浴锅，16种PAHs 混合标准品（o2si）。其它试剂：正己烷，乙腈，四氢呋喃，高纯水。
1.2方法
1.2.1仪器条件
1.2.1.1 高效液相色谱仪条件
色谱柱：Waters PAH 4.6×250mm C18；流动相：乙腈：水梯度洗脱，25分钟内乙腈浓度50%至100%变化；流速：1.5ml/min；进样量：10?l；柱温30℃ 。
1.2.1.2 15种多环芳烃荧光检测器检测波长设置，见表1。
1.2.2样品前处理
取样：准确称取0.400g植物油于50ml离心管，用5 mL正己烷溶解，涡旋混匀；过柱：将溶解好的油样通过预先用30 mL正己烷活化过的中性氧化铝固相萃取柱Cleanert BaP-SPE，用80mL正己烷洗脱，收集洗脱液；浓缩：在45℃水浴中将洗脱液旋转蒸发至近干，用总计10 mL的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到15ml离心管，氮吹仪吹干；定容：用200?L的乙腈四氢呋喃溶液（9+1）定容。 1.2.3标准系列的制备
将200mg/L的PAHs混合标准溶液用乙腈稀释至2.0ug/mL的中间储备液，-18℃避光保存，临用时再用乙腈配制浓度为0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.20ug/mL的标准系列。
2结果与讨论
2.1检出限、精密度及加标回收率。
在优化的实验条件下，以荧光强度y对多环芳烃浓度x进行线性回归，得到15种多环芳烃的回归方程，相关系数在0.9984～0.9997之间，15种多环芳烃在浓度为0.01～0.50ug/mL的范围内，荧光检测器下呈良好的线性关系。将0.08ug/ml的标准溶液按照1.2.1的仪器条件重复测定6次，保留时间定性，以峰面积计算各多环芳烃的RSD。将一定含量的标准品加入植物油样品基质中，按本文方法处理后上机测定，根据各种PAHs的色谱图信噪比计算出每种多环芳烃的检出限。准确吸取一定体积的标准溶液，加入到0.400g基质油样品中，震荡混匀，前处理后上机测定，根据峰面积计算15种多环芳烃的含量，每个浓度水平测定三次，用均值计算15种多环芳烃的加标回收率。
2.2色谱柱的选择
将Waters PAHs专用柱和普通C18柱分离多环芳烃进行效果比较，发现Waters PAHs柱具有分析时间短，分离效果好，灵敏度高的特点，15种多环芳烃标准在Waters PAHs柱上均能达到基线分离，而waters SunFireTMC18色谱柱有芴、二氢苊以及苯并[g，h，i]芘、茚并[1，2，3-c，d]芘分离效果不佳，可能会对化合物的定性定量产生影响，且全部分析时间明显长于Waters PAHs专用柱，降低了实验效率，不利于数量较大样品的检测。因此本方法采用Waters PAHs柱对15种多环芳烃进行分离。
2.3实际样品的测定
本次实验从西安市各大超市采集了桶装定型包装菜籽油，花生油，以及玉米油，用本方法检测，各种植物油中15种多环芳烃的检测结果均小于检出限，为未检出，实际样品图谱见图3。
3 结论
实践证明本实验所用方法具有样品前处理简单，检测方法高效快速，灵敏度高，准确性好等优点，能够满足植物油中多种多环芳烃含量的检测。
参考文献
[1]金华丽，谷克仁.油炸食品安全性分析及危害预防[J].中国油脂，2010，35（9）：74-77.
[2]PURCARO G，MORET S，CONTE LS.Overview on polycyclic aromatic hy-drocarbons： occurrence，legislation and innovative determination in foods[J].Talanta，2013，105（4）： 292-305.
[3]RAMESH A，ARCHIBONG AE，HUDERSON AC，etal.Veterinary Toxicol ogy[M].Second Edition .USA：Academic Press ，2012：797-809.
[4]曹梦思，王君，张立实.食品中多环芳烃的研究现状[J].卫生研究，2015，44（1）：151-157.
[5]王振刚.环境卫生学[M].北京：人民卫生出版社，2000.
[6]Al-RASHDAN A，HELALEH MIH，NISAR A，etal.Determination of the levels of polycyclic aromatic hydrocarbons in toasted bread using Gas Chromatography Mass Spectrometry[J].Int J Anal Chem，2010，2010（7）：8：1-9.
[7]ROJO CAMARGO MC，ANTONIOLLI PR，VICENTE E. Evaluation of polycy-clic aromatic hydrocarbons content in different stages of soybean oils processing[J].Food Chem，2012，135（3）：937-942.
【关键词】多环芳烃；植物油；高效液相色谱法；食品安全
Abstract： Objective To establish a method for simultaneous determination of 15 PAHs in plant oil by SPE-HPLC.Methods The edible vegetable oil was dissolved in n-hexaneand，cleaned up with neutral alumina SPE cartridges. The 15 PAHs was carried out by waters-PAHs column （ 4. 6 mm ×250 mm） with a gradient elution using acetonitrile-water as mobile phase at a flow rate of 1. 5 ml /min，the column temperature was 30 ℃，and the injection volume was 10 μl. Detection was carried out by a fluorescence detector with external standard.Results The 15 PAHs solution was a good linear relationship at a concentration within a range of 0.01-0.50ug / mL， The LOD was in the range of 0. 1 ～ 1.5 μg /kg with average recovery ranging from 62.14% to 120.35%. The RSD was in the range of 0. 91% ～ 4.32 0%.Conclusions The method had the advantages of simple pretreatment，high sensitivity and accuracy，which could be applied to the determination of the 15 PAHs in plant oil.
Keywords： PAHs ；Edible vegetable oil ；HPLC；Food safety
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2016）05-0010-02
多环芳烃是一组由两个或两个以上苯环和稠环链接在一起的芳香族化合物及其衍生物，来源于工业生产、有机物热解或不完全燃烧等，为持久性有机污染物 [1]。环境中的PAH能通过生物转化[2，3]等多种途径到达食物链，参与机体的代谢作用。PAHs 对生育、发育、血液、心脏、神经及免疫系统等具 有毒性，能诱发多种癌症[4]。流行病学研究表明[5]，PAHs 通过皮肤、呼吸道、消化道等均可被人体吸收，有诱发皮肤癌、肺癌、直肠癌、膀胱癌等作用，人类对 PAHs 暴露的主要来源是通过饮食[6]。 植物油是饮食中多环芳烃的主要来源[7]。由于植物原料中 PAHs 的存在，生产过程中工艺、技术、设备条件的不足，以及在运输过程中受环境污染等原因，都可能导致食用油中最终含有一定量PAHs。因此建立植物油中多种PAHs同时测定的方法，监测植物油中多环芳烃的含量显得尤为重要。食用植物油基质复杂，PAHs种类繁多且大多含量较低，高效的提取净化浓缩方法是测定的关键。目前植物油中PAHs的检测方法主要有荧光分光光度法、GC/GC-MS法、高效液相色谱法，本研究通过查阅文献及其进行相关实验研究，建立了中性氧化铝固相萃取柱--高效液相色谱法测定植物油中15种多环芳烃的检测方法。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1样品
1.1.2 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪（waters e2695-2475），色谱柱Waters PAH 4.6×250mm，中性氧化铝固相萃取柱Cleanert BaP-SPE，快速混合器，氮吹仪；高频数控超声清洗器；旋转蒸发仪，电热恒温水浴锅，16种PAHs 混合标准品（o2si）。其它试剂：正己烷，乙腈，四氢呋喃，高纯水。
1.2方法
1.2.1仪器条件
1.2.1.1 高效液相色谱仪条件
色谱柱：Waters PAH 4.6×250mm C18；流动相：乙腈：水梯度洗脱，25分钟内乙腈浓度50%至100%变化；流速：1.5ml/min；进样量：10?l；柱温30℃ 。
1.2.1.2 15种多环芳烃荧光检测器检测波长设置，见表1。
1.2.2样品前处理
取样：准确称取0.400g植物油于50ml离心管，用5 mL正己烷溶解，涡旋混匀；过柱：将溶解好的油样通过预先用30 mL正己烷活化过的中性氧化铝固相萃取柱Cleanert BaP-SPE，用80mL正己烷洗脱，收集洗脱液；浓缩：在45℃水浴中将洗脱液旋转蒸发至近干，用总计10 mL的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到15ml离心管，氮吹仪吹干；定容：用200?L的乙腈四氢呋喃溶液（9+1）定容。 1.2.3标准系列的制备
将200mg/L的PAHs混合标准溶液用乙腈稀释至2.0ug/mL的中间储备液，-18℃避光保存，临用时再用乙腈配制浓度为0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.20ug/mL的标准系列。
2结果与讨论
2.1检出限、精密度及加标回收率。
在优化的实验条件下，以荧光强度y对多环芳烃浓度x进行线性回归，得到15种多环芳烃的回归方程，相关系数在0.9984～0.9997之间，15种多环芳烃在浓度为0.01～0.50ug/mL的范围内，荧光检测器下呈良好的线性关系。将0.08ug/ml的标准溶液按照1.2.1的仪器条件重复测定6次，保留时间定性，以峰面积计算各多环芳烃的RSD。将一定含量的标准品加入植物油样品基质中，按本文方法处理后上机测定，根据各种PAHs的色谱图信噪比计算出每种多环芳烃的检出限。准确吸取一定体积的标准溶液，加入到0.400g基质油样品中，震荡混匀，前处理后上机测定，根据峰面积计算15种多环芳烃的含量，每个浓度水平测定三次，用均值计算15种多环芳烃的加标回收率。
2.2色谱柱的选择
将Waters PAHs专用柱和普通C18柱分离多环芳烃进行效果比较，发现Waters PAHs柱具有分析时间短，分离效果好，灵敏度高的特点，15种多环芳烃标准在Waters PAHs柱上均能达到基线分离，而waters SunFireTMC18色谱柱有芴、二氢苊以及苯并[g，h，i]芘、茚并[1，2，3-c，d]芘分离效果不佳，可能会对化合物的定性定量产生影响，且全部分析时间明显长于Waters PAHs专用柱，降低了实验效率，不利于数量较大样品的检测。因此本方法采用Waters PAHs柱对15种多环芳烃进行分离。
2.3实际样品的测定
本次实验从西安市各大超市采集了桶装定型包装菜籽油，花生油，以及玉米油，用本方法检测，各种植物油中15种多环芳烃的检测结果均小于检出限，为未检出，实际样品图谱见图3。
3 结论
实践证明本实验所用方法具有样品前处理简单，检测方法高效快速，灵敏度高，准确性好等优点，能够满足植物油中多种多环芳烃含量的检测。
参考文献
[1]金华丽，谷克仁.油炸食品安全性分析及危害预防[J].中国油脂，2010，35（9）：74-77.
[2]PURCARO G，MORET S，CONTE LS.Overview on polycyclic aromatic hy-drocarbons： occurrence，legislation and innovative determination in foods[J].Talanta，2013，105（4）： 292-305.
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[4]曹梦思，王君，张立实.食品中多环芳烃的研究现状[J].卫生研究，2015，44（1）：151-157.
[5]王振刚.环境卫生学[M].北京：人民卫生出版社，2000.
[6]Al-RASHDAN A，HELALEH MIH，NISAR A，etal.Determination of the levels of polycyclic aromatic hydrocarbons in toasted bread using Gas Chromatography Mass Spectrometry[J].Int J Anal Chem，2010，2010（7）：8：1-9.
[7]ROJO CAMARGO MC，ANTONIOLLI PR，VICENTE E. Evaluation of polycy-clic aromatic hydrocarbons content in different stages of soybean oils processing[J].Food Chem，2012，135（3）：937-942.