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【摘要】目的：规范血站冷沉淀凝血因子中纤维蛋白原的检测方法，简化操作步骤，提高准确性。方法：根据Von Clauss法的原理，结合冷沉淀凝血因子中纤维蛋白原的浓度较高特点，将待测或参比血浆稀释比例由原来的10倍稀释调整为20倍稀释。结果：纤维蛋白原的浓度对数与凝固时间的对数呈现良好的线性关系，相关系数r=-0.999，线性达到1.24～9.92g/L。结论：血站使用的半自动或全自动血凝仪，内置的纤维蛋白原检测方法为经典的Von Clauss法，但冷沉淀凝血因子中纤维蛋白原的浓度已超出其线性范围，检测前需手工稀释，将Von Clauss法进行改良后，样本无需稀释，其线性范围完全满足需求，既减少了试验步骤，又减少了因手工稀释带来的误差，提高了准确性。
【关键词】改良Von Clauss法 冷沉淀凝血因子 纤维蛋白原
随着输血医学的不断发展，冷沉淀凝血因子的临床应用倍受国内外医学界的重视[1]。冷沉淀凝血因子中含Ⅷ因子、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、血管性血友病因子等，目前广泛应用于甲型血友病、血管性假性血友病、纤维蛋白缺乏症、DIC、烧伤以及其他出血性疾病的治疗。冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子和纤维蛋白原含量是直接影响治疗效果的重要因素，以2个单位的冷沉淀凝血因子为例，GB 18469-2012《全血及成分血质量要求》中要求纤维蛋白原含量≥150mg，Ⅷ因子含量≥80IU[2]。血站质控科每月都会对按照制备量的1%或至少4袋进行抽样检测[3]，离心法制备的冷沉淀凝血因子容量为20～30ml，纤维蛋白原浓度一般至少在5g/L以上。传统的检测方法为将样本进行稀释后检测，为了更好地对冷沉淀凝血因子中的纤维蛋白原进行质量控制，保证准确性，现对Von Clauss试验方法进行改良，报道如下：
1材料与方法
1.1材料
希森美康生物科技（无锡）有限公司提供的纤维蛋白原测定试剂、TC缓冲液，希森美康医用电子（上海）有限公司提供的CA CLEAN I、标准血浆。
1.2仪器
全自动血凝仪（制造商：希森美康，型号：CA-510）
1.3方法
1.3.1准备试剂：按试剂说明书要求复溶纤维蛋白原测定试剂和标准血浆。
1.3.2方法设置：在仪器主界面依次按“Setting”“Analysis Setting”“Test Protocol”“Fbg”，此时“End Point”设置为50%，“Sensitivity.”设置为High Gain，“SampleVol”设置为5μl，“Dil.Vol.”设置为95μl，“Reagent 1”设置为180sec，“Reag.Vol.”设置为50μl，“Post.Rinse”设置为“1”，其他设置不变，按“Fix”保存。
1.3.3 标准曲线的设定：将各试剂按位置放好，复溶好的标准血浆放到“1号”标本位。在仪器主界面依次按“Standard Curve”“Select Test”“Fbg”“Standard Analysis”，连续按“Select Dil.Set”选择第11种稀释模式，“Replic.”调成2次，在“Fbg”处按标准血浆说明书键入靶值浓度，按“Start”开始定标。
2结果
相关系数r=-0.999，线性范围1.24～9.92g/L，表明纤维蛋白原浓度对数与凝固时间的对数呈很好的线性关系，且线性范围适合测定冷沉淀凝血因子中的纤维蛋白原。
3讨论
几乎所有的血凝仪都是针对临床实验室设计的，Von Clauss法为经典的测定纤维蛋白原方法，依据健康人群血浆中纤维蛋白原含量设计的稀释比例，即10倍稀释，10μl样本与90μlTC缓冲液混合后37℃预热3分钟，再加入50μl的凝血酶（纤维蛋白原测定试剂），然后仪器判定凝固时间，一般都取50%凝固点时间为凝固时间，因为“S型”凝固曲线此时最为敏感，纤维蛋白原的浓度对数和凝固时间的对数呈线性关系。笔者根据血站的实际工作需要，对上述方法进行改良，改为20倍稀释，即5μl样本与95μl TC缓冲液混合，其他步骤没变，该型号的血凝仪加样灵敏度为1μl，完全满足准确度需求，减少了手工预稀释带来的误差，提高了准确性。血凝仪在定标时大多提供多个稀释模式，笔者也尝试了在未改变稀释倍数的前提下，在定标时，选择较小稀释倍数的模式，即线性范围适合较高纤维蛋白原浓度的曲线，结果纤维蛋白原的浓度对数和凝固时间的对数的线性关系很差，r值不理想。其原因为在测定浓度较高的点时，凝固时间很短，只有几秒，因此两对数之间线性很差。更改了方法学里的稀释倍数后，重新定标解决了这一问题，对Ⅷ因子的检测也用类似的思路加以改进，成分血液和正常血浆中的一部分检测项目的浓度有很大差别，而大多数的仪器设备、试剂都是针对临床的，相对于血站来说，只有我们不断的改进方法，才能找到适合成分血液检测的新思路。
参考文献：
[1]毕绍华，李永志，等.冷沉淀制剂治疗Ⅱ度烧伤的临床观察[J].中国输血杂志，2007，20（3）：31.
[2]GB 18469-2012，全血及成分血质量要求[S].
[3]卫医政发〔2012〕1号附件，血站技术操作规程[S].
【关键词】改良Von Clauss法 冷沉淀凝血因子 纤维蛋白原
随着输血医学的不断发展，冷沉淀凝血因子的临床应用倍受国内外医学界的重视[1]。冷沉淀凝血因子中含Ⅷ因子、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、血管性血友病因子等，目前广泛应用于甲型血友病、血管性假性血友病、纤维蛋白缺乏症、DIC、烧伤以及其他出血性疾病的治疗。冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子和纤维蛋白原含量是直接影响治疗效果的重要因素，以2个单位的冷沉淀凝血因子为例，GB 18469-2012《全血及成分血质量要求》中要求纤维蛋白原含量≥150mg，Ⅷ因子含量≥80IU[2]。血站质控科每月都会对按照制备量的1%或至少4袋进行抽样检测[3]，离心法制备的冷沉淀凝血因子容量为20～30ml，纤维蛋白原浓度一般至少在5g/L以上。传统的检测方法为将样本进行稀释后检测，为了更好地对冷沉淀凝血因子中的纤维蛋白原进行质量控制，保证准确性，现对Von Clauss试验方法进行改良，报道如下：
1材料与方法
1.1材料
希森美康生物科技（无锡）有限公司提供的纤维蛋白原测定试剂、TC缓冲液，希森美康医用电子（上海）有限公司提供的CA CLEAN I、标准血浆。
1.2仪器
全自动血凝仪（制造商：希森美康，型号：CA-510）
1.3方法
1.3.1准备试剂：按试剂说明书要求复溶纤维蛋白原测定试剂和标准血浆。
1.3.2方法设置：在仪器主界面依次按“Setting”“Analysis Setting”“Test Protocol”“Fbg”，此时“End Point”设置为50%，“Sensitivity.”设置为High Gain，“SampleVol”设置为5μl，“Dil.Vol.”设置为95μl，“Reagent 1”设置为180sec，“Reag.Vol.”设置为50μl，“Post.Rinse”设置为“1”，其他设置不变，按“Fix”保存。
1.3.3 标准曲线的设定：将各试剂按位置放好，复溶好的标准血浆放到“1号”标本位。在仪器主界面依次按“Standard Curve”“Select Test”“Fbg”“Standard Analysis”，连续按“Select Dil.Set”选择第11种稀释模式，“Replic.”调成2次，在“Fbg”处按标准血浆说明书键入靶值浓度，按“Start”开始定标。
2结果
相关系数r=-0.999，线性范围1.24～9.92g/L，表明纤维蛋白原浓度对数与凝固时间的对数呈很好的线性关系，且线性范围适合测定冷沉淀凝血因子中的纤维蛋白原。
3讨论
几乎所有的血凝仪都是针对临床实验室设计的，Von Clauss法为经典的测定纤维蛋白原方法，依据健康人群血浆中纤维蛋白原含量设计的稀释比例，即10倍稀释，10μl样本与90μlTC缓冲液混合后37℃预热3分钟，再加入50μl的凝血酶（纤维蛋白原测定试剂），然后仪器判定凝固时间，一般都取50%凝固点时间为凝固时间，因为“S型”凝固曲线此时最为敏感，纤维蛋白原的浓度对数和凝固时间的对数呈线性关系。笔者根据血站的实际工作需要，对上述方法进行改良，改为20倍稀释，即5μl样本与95μl TC缓冲液混合，其他步骤没变，该型号的血凝仪加样灵敏度为1μl，完全满足准确度需求，减少了手工预稀释带来的误差，提高了准确性。血凝仪在定标时大多提供多个稀释模式，笔者也尝试了在未改变稀释倍数的前提下，在定标时，选择较小稀释倍数的模式，即线性范围适合较高纤维蛋白原浓度的曲线，结果纤维蛋白原的浓度对数和凝固时间的对数的线性关系很差，r值不理想。其原因为在测定浓度较高的点时，凝固时间很短，只有几秒，因此两对数之间线性很差。更改了方法学里的稀释倍数后，重新定标解决了这一问题，对Ⅷ因子的检测也用类似的思路加以改进，成分血液和正常血浆中的一部分检测项目的浓度有很大差别，而大多数的仪器设备、试剂都是针对临床的，相对于血站来说，只有我们不断的改进方法，才能找到适合成分血液检测的新思路。
参考文献：
[1]毕绍华，李永志，等.冷沉淀制剂治疗Ⅱ度烧伤的临床观察[J].中国输血杂志，2007，20（3）：31.
[2]GB 18469-2012，全血及成分血质量要求[S].
[3]卫医政发〔2012〕1号附件，血站技术操作规程[S].