【摘 要】
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目的构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒。方法应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定。用重
【机 构】
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广东医科大学附属医院心血管内科; 广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室; 广东医科大学临床医学研究中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81670348);广东省医学科学技术研究基金(No.A2016143);广东省自然科学基金(No.2016A030313678、2015A030310359、2016A030310359);湛江市科技计划项目(No.2014A01033、2015C01006);广东医学院附属医院博士基金(No.BJ201511)
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目的构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒。方法应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定。用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒p BHGdelta E1lox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达。结果基因测序显示APE1过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293A细胞包装成功。APE1过表达和shRNA腺病毒明显影响人AC16心肌细胞中APE1蛋白表达水平。结论成功构建了人APE1过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体。
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