【摘 要】
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DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA聚合酶是病毒复制过程的关键酶.从家蚕杆状病毒(BmN-PV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因BmNPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac系统
【机 构】
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江苏大学生命科学研究院,江苏镇江,212013
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DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA聚合酶是病毒复制过程的关键酶.从家蚕杆状病毒(BmN-PV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因BmNPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBmNPV-POL,并感染家蚕5龄幼虫,通过SDS-PAGE和Western blotting检测重组BmNPV-POL蛋白在蚕体内成功表达,经Ni-NTA柱纯化获得了纯度较高的重组BmNPV-POL蛋白.以poly(dA)/oligo(dT)为模板,比较在原核细胞和家蚕杆状病毒表达系统获得的重组Bm-NPV-POL蛋白的酶活性,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组BmNPV-POL的酶活性明显较高.利用家蚕杆状病毒表达系统简便、快速获得重组BmNPV-POL蛋白,有助于后续对BmNPV复制机制的研究.
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