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【摘要】目的：探讨丹参药材中丹参酮ⅡA的最佳提取工艺条件。方法：以丹参酮ⅡA为定量指标成分，确定提取时间，提取次数，乙醇倍量及浓度为影响因素，并以L9(33)正交实验安排实验。结果：最佳提取工艺条件为：10倍量85%乙醇浸泡丹参30分钟后,超声提取1次，每次40分钟。结论：优化的提取条件效率高，可增加药材的利用率。
【关键词】提取;丹参酮；正交试验
【中图分类号】R282.7【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0016-01
丹参酮是丹参中具有橙黄色和橙红色特征的脂溶性二萜类化合物，按其结构的不同可分为丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、二氢丹参酮I、羟基丹参酮、丹参酮甲酯、异丹参酮、异隐丹参酮等10多种成分，其中丹参酮ⅡA是丹参中脂溶性成分的代表，丹参酮ⅡA还具有天然抗氧化作用，大量的研究表明在抗肿瘤、心脑血管疾病、抗菌消炎等方面均有良好的治疗作用[1～3]。我们采用超声提取法，运用正交试验，并通过紫外分光光度计测定含量，以含量为考察指标，对丹参酮ⅡA的提取工艺进行优选。
1仪器与试药
1.1仪器SHIMADZU UV-2550型紫外可见分光光度仪(日本岛津)，KQ-300E型超声机（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2试药丹参药材购于锦州市药材公司，经本院中药库鉴定为正品；丹参酮ⅡA对照品（编号110766-200518，中国药品生物制品检定所）；所用试剂均为分析纯，水为去离子水。
2方法
2.1丹参酮ⅡA标准试液配制精密称取干燥至恒重的丹参酮ⅡA标准品1.1mg置10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀。
2.2测定波长的选择准确移取丹参酮ⅡA标准试液0.4ml置于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀。以氯仿为空白对照，变化波长在260nm～600nm，测定吸光度A。结果表明在270nm时，具有最大A值，所以确定270nm为最大吸收。
2.3丹参酮ⅡA标准曲线的绘制[4]精密吸取丹参酮ⅡA标准试液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml分别置于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀。以氯仿为空白对照，在270nm波长处测定吸收度,以吸收度A、浓度C绘制标准曲线。并求出回归方程为:A=0.0879C+0.0107(r=0.9999)。
2.4標准曲线的稳定性将所配制的标准溶液放置24h，按2.2项所示方法重新测定吸光度，发现结果没有变化，即吸收曲线稳定。
2.5提取方法取丹参粗粉5g,按正交试验表L9(33)安排实验,浸泡30min,抽滤收集滤液,量取滤液体积。精密吸取滤液0.25ml置与25ml容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀。以氯仿为空白对照在270nm波长处测定吸收度，根据回归方程，将测得的吸光度代入回归方程A=0.0879C+0.0107(r=0.9999)，计算丹参酮ⅡA浓度，以100g丹参中含丹参酮ⅡA的量g为单位计算，求得丹参酮ⅡA的含量。
2.6正交试验设计根据丹参酮ⅡA的理化性质，选择在提取中三个影响因素，见表1。采用三因素水平的正交试验表L9(33))设计试验方案。
3结果
3.1根据表1进行正交实验结果见表2。为了确定显著性因子，我们对表2进行方差分析和显著性检验，见表3。
直观分析和方差分析结果表明,三种因素对提取结果影响大小依次为A>C>B。A因素和C因素对超声波提取法提取丹参酮ⅡA有显著意义(<0.05)，B因素对提取丹参酮ⅡA影响没有显著意义，由此得出丹参超声法提取的最佳工艺为A2B1C3,即以10倍量85%乙醇浸泡丹参30min后,超声提取1次，每次40min。
4讨论
产地不同的丹参药材,由于种属不同，其所含丹参酮ⅡA的量也不相同。2000版《中国药典》中规定丹参以丹参酮ⅡA为指标,含量不得少于0.2%。
目前，工业上提取丹参主要以热回流法为主，该方法提取时间长且提取率低。丹参酮类物质属于热敏性物质，长时间受热易发生分解，传统的热回流法不仅浪费能源还使热敏性的丹参酮发生了分解[5-7]。本文采用超声波提取法提取丹参酮ⅡA，与许多传统的提取方法相比，具有能提高有效成分的溶出速度和溶出次数，缩短提取时间，节省溶剂的消耗等优点。
参考文献
[1]蔡丽萍，习志刚，杨红.丹参酮的药理作用和临床研究进展[J].广东药学院学报，2008，24(3):321-324.
[2]王冬，田亚平，姜英雁，等．丹参酮ⅡA抑制Hela细胞生长及诱导凋亡的体外实验研究[J]．中国现代医学杂志，2007，17(6)：676-678．
[3]孙学刚，贾玉华．丹参酮ⅡA对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响[J]．中国中医药信息杂志，2002，9(9)：21．
[4]蔡杰,苏美霞,吴日明,等.正交试验法优化总丹参酮提取工艺的实验研究[J].现代医药卫生，2005，21(12):1493-1494.
[5]凌海燕，鲁学照，赵咏丽，等．丹参水溶性成分的研究概况[J].天然产物研究与开发，1997，11(1)：76-81．
(收稿日期：2009.02.01)
【关键词】提取;丹参酮；正交试验
【中图分类号】R282.7【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0016-01
丹参酮是丹参中具有橙黄色和橙红色特征的脂溶性二萜类化合物，按其结构的不同可分为丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、二氢丹参酮I、羟基丹参酮、丹参酮甲酯、异丹参酮、异隐丹参酮等10多种成分，其中丹参酮ⅡA是丹参中脂溶性成分的代表，丹参酮ⅡA还具有天然抗氧化作用，大量的研究表明在抗肿瘤、心脑血管疾病、抗菌消炎等方面均有良好的治疗作用[1～3]。我们采用超声提取法，运用正交试验，并通过紫外分光光度计测定含量，以含量为考察指标，对丹参酮ⅡA的提取工艺进行优选。
1仪器与试药
1.1仪器SHIMADZU UV-2550型紫外可见分光光度仪(日本岛津)，KQ-300E型超声机（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2试药丹参药材购于锦州市药材公司，经本院中药库鉴定为正品；丹参酮ⅡA对照品（编号110766-200518，中国药品生物制品检定所）；所用试剂均为分析纯，水为去离子水。
2方法
2.1丹参酮ⅡA标准试液配制精密称取干燥至恒重的丹参酮ⅡA标准品1.1mg置10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀。
2.2测定波长的选择准确移取丹参酮ⅡA标准试液0.4ml置于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀。以氯仿为空白对照，变化波长在260nm～600nm，测定吸光度A。结果表明在270nm时，具有最大A值，所以确定270nm为最大吸收。
2.3丹参酮ⅡA标准曲线的绘制[4]精密吸取丹参酮ⅡA标准试液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml分别置于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀。以氯仿为空白对照，在270nm波长处测定吸收度,以吸收度A、浓度C绘制标准曲线。并求出回归方程为:A=0.0879C+0.0107(r=0.9999)。
2.4標准曲线的稳定性将所配制的标准溶液放置24h，按2.2项所示方法重新测定吸光度，发现结果没有变化，即吸收曲线稳定。
2.5提取方法取丹参粗粉5g,按正交试验表L9(33)安排实验,浸泡30min,抽滤收集滤液,量取滤液体积。精密吸取滤液0.25ml置与25ml容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀。以氯仿为空白对照在270nm波长处测定吸收度，根据回归方程，将测得的吸光度代入回归方程A=0.0879C+0.0107(r=0.9999)，计算丹参酮ⅡA浓度，以100g丹参中含丹参酮ⅡA的量g为单位计算，求得丹参酮ⅡA的含量。
2.6正交试验设计根据丹参酮ⅡA的理化性质，选择在提取中三个影响因素，见表1。采用三因素水平的正交试验表L9(33))设计试验方案。
3结果
3.1根据表1进行正交实验结果见表2。为了确定显著性因子，我们对表2进行方差分析和显著性检验，见表3。
直观分析和方差分析结果表明,三种因素对提取结果影响大小依次为A>C>B。A因素和C因素对超声波提取法提取丹参酮ⅡA有显著意义(<0.05)，B因素对提取丹参酮ⅡA影响没有显著意义，由此得出丹参超声法提取的最佳工艺为A2B1C3,即以10倍量85%乙醇浸泡丹参30min后,超声提取1次，每次40min。
4讨论
产地不同的丹参药材,由于种属不同，其所含丹参酮ⅡA的量也不相同。2000版《中国药典》中规定丹参以丹参酮ⅡA为指标,含量不得少于0.2%。
目前，工业上提取丹参主要以热回流法为主，该方法提取时间长且提取率低。丹参酮类物质属于热敏性物质，长时间受热易发生分解，传统的热回流法不仅浪费能源还使热敏性的丹参酮发生了分解[5-7]。本文采用超声波提取法提取丹参酮ⅡA，与许多传统的提取方法相比，具有能提高有效成分的溶出速度和溶出次数，缩短提取时间，节省溶剂的消耗等优点。
参考文献
[1]蔡丽萍，习志刚，杨红.丹参酮的药理作用和临床研究进展[J].广东药学院学报，2008，24(3):321-324.
[2]王冬，田亚平，姜英雁，等．丹参酮ⅡA抑制Hela细胞生长及诱导凋亡的体外实验研究[J]．中国现代医学杂志，2007，17(6)：676-678．
[3]孙学刚，贾玉华．丹参酮ⅡA对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响[J]．中国中医药信息杂志，2002，9(9)：21．
[4]蔡杰,苏美霞,吴日明,等.正交试验法优化总丹参酮提取工艺的实验研究[J].现代医药卫生，2005，21(12):1493-1494.
[5]凌海燕，鲁学照，赵咏丽，等．丹参水溶性成分的研究概况[J].天然产物研究与开发，1997，11(1)：76-81．
(收稿日期：2009.02.01)