目的建立柱前衍生－高效液相色谱法同时测定不同产地、不同叶形五指毛桃FicushirtaVahl根中16种游离氨基酸含量，评价其质量差异。方法采用高效液相色谱法，以异硫氰酸苯酯进行柱前衍生化，采用UltimateAminoAcid色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.1mol/L乙酸钠—乙腈为流动相，进行梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温为40℃，检测波长为254nm。结果9个产地12份五指毛桃根中16种氨基酸在0.215～7.692μg范围内具有良好的线性关系，相关系数均大于0.9992，平均加样回收率在98.1% ～ 105.9%，RSD为0.67% ～2.11%，L-天门冬氨酸、L-谷氨酸、L-丝氨酸、L-甘氨酸、L-组氨酸、L-精氨酸、L-苏氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-甲硫氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-苯丙氨酸和L-赖氨酸的平均含量分别为3.308、3.424、2.750、2.978、1.302、4.549、2.778、3.989、3.818、1.327、3.732、0.395、2.925、4.549、2.873、3.305mg/g。不同产地、四种叶形五指毛桃根中16种氨基酸总含量存在差异：从产地上来比较，含量最高的为广西钦州灵山县，其次为广东河源龙川县，含量最低的为福建漳州龙海区程溪镇；同一产地不同叶形五指毛桃根中氨基酸总含量由高到低为三指浅裂＞七指深裂＞五指深裂＞全缘。结论该方法使16种氨基酸很好地进行了分离，可靠准确，且加样回收率较高，可作为五指毛桃根中氨基酸含量的测定方法，并可以游离氨基酸含量来评价五指毛桃质量。