RP-HPLC法测定珍珠明目滴眼液中16种氨基酸的含量

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目的:柱前衍生HPLC法测定珍珠明目滴眼液中16种氨基酸的含量。方法:样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠缓冲液(p H 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长254 nm,柱温43℃。结果:16种氨基酸质量浓度在一定范围内呈良好的线性关系(r=0.999 0~0.999 9);16种氨基酸平均回收率在82.7%~108.4%之间,RSD除天冬氨酸为4.5%、谷氨酸为4.3%,丝氨酸、酪氨酸和亮氨酸(Leu)为3.5%~4.0%外,其他均低于3.3%。不同厂家样品的氨基酸色谱指纹图谱差异较大,7个厂家(A~G)不同批次样品16种氨基酸总量平均值分别为44.6~50.0、20.9~29.4、47.9~55.5、154.2~164.3、13.3~15.0、8.9~13.4、181.3~192.7μg·m L-1。D和G厂家样品中谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、丙氨酸(Ala)和脯氨酸(Pro)5种氨基酸的含量高于其他厂家3~50倍。结论:本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于珍珠明目滴眼液中氨基酸的质量控制。
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