【摘 要】
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目的:探讨和优化循环miRNA检测方法,建立稳定可靠的用于研究血浆miRNA的检测平台。方法:提取4例健康体检者的血浆,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对miR-21进行检测。比较苯酚
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目的:探讨和优化循环miRNA检测方法,建立稳定可靠的用于研究血浆miRNA的检测平台。方法:提取4例健康体检者的血浆,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对miR-21进行检测。比较苯酚氯仿抽提法和试剂盒法的提取效率;针对miR-2911成熟体,建立标准曲线;通过qRT-PCR对外参照miR-2911及血浆miR-21进行检测,评估循环检测方法的重复性。结果:苯酚氯仿抽提法循环miRNA的提取效率是试剂盒法的8倍;miR-2911拷贝数log值与循环阈值(Ct)的标准曲线方程为Y=-3.242X+35.28,R~2=0.991,呈良好的线性关系。血浆miR-21批内批间重复性实验的标准差(SD)在0.144～0.793、变异系数(CV)在0.52%～2.76%,说明该方法有较好的重复性。以miR-2911作为外参照,同一血浆标本miR-21的4次检测结果中ΔCt值的SD为0.1445,CV为1.225%,提示miR-2911可作为血浆miRNAs qRT-PCR检测的稳定外参。结论:利用外源miR-2911能有效监测qRT-PCR检测方法的稳定性,为循环miRNA的研究提供了较好的实验基础。
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