【摘 要】
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目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275修饰的肝癌细胞exosome所含肿瘤抗原和免疫分子的变化. 方法 采用蔗糖梯度离心联合超滤技术分离和纯化肝癌HepG2细胞在MS-275处理前后
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目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275修饰的肝癌细胞exosome所含肿瘤抗原和免疫分子的变化. 方法 采用蔗糖梯度离心联合超滤技术分离和纯化肝癌HepG2细胞在MS-275处理前后分泌的exosome,并用免疫电镜和Western blot杂交技术分别观察exosome表达热休克蛋白70、人类白细胞抗原(HLA)-I、HLA-II、NY-ESO-1和CD80等免疫分子的变化.MS-275处理前后样本均数的比较用配对t检验.结果 经MS-275处理后,肝癌HepG2细胞分泌exosome的数量和总蛋白含量均较处理前显著增加,分别为(303.0±3.2)×106个/ml比(236.0±2.8)×106个/ml和(1.37±0.18) mg比(0.78±0.11)mg,t值分别为27.29和4.85,P值均＜0.01.免疫电镜下,100个exosome所含免疫分子HSP70、HLA-Ⅰ、HLA-DR和CD80胶体金颗粒数均明显增加,分别为(79.8±5.2)个比(60.2±3.2)个、(65.6±6.3)个比(38.4±2.7)个、(26.9±2.7)个比(3.0±0.16)个和(42.7±5.2)个比(28.9±1.9)个,t值分别为5.56、6.87、15.3和4.32,P值＜0.01或＜0.05；NY-ESO-1所含胶体金颗粒数无明显变化[(40.2±4.6)个比(32.2±4.5)个,t=2.15,P＞0.05].Western blot结果也证实了上述免疫电镜的发现.结论 MS-275修饰肝癌细胞能显著改变exosome各种免疫分子的含量和种类,有利于增强exosome的免疫刺激作用,为体外大规模制备抗肝癌亚细胞瘤苗提供了新思路.
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