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[摘要]奶牛传染性鼻气管炎对奶牛的产奶量及繁殖性能有影响，奶牛群继发性流产有时高达50％。本研究于2006－2008年对某省部分奶牛场进行这5种疫病的血清学监测，以了解这些病的流行情况，尽早控制，减少损失，保障某省奶牛养殖业的快速发展。
[关键词]乙型肝炎；奶牛传染病；检测
一、材料与方法
1.材料
乙型肝炎诊断试剂盒购于上海某生物有限公司；牛传染性胸膜肺炎补体结合反应抗原、标准阴性血清和阳性血清、溶血素补体由某生物制品厂提供；牛传染性鼻气管炎抗原、IBR弱毒株、阳性血清购于中国兽医药品监察所，阴性血清取自检查牛；奶牛血清来源于某省市的奶牛场和奶牛专业户。
2.方法
(1)酶联免疫吸附试验检测奶牛类人乙型肝炎
①每孔加入待检样品50μL，设阴、阳性对照各2孔，每孔50μL，并设空白对照1孔。②手工洗板，弃去孔内液体，洗涤液注满每孔静置5s，甩干、重复5次。③每孔加入酶结合物50μL(空白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃孵育30min。④重复操作②。⑤每孔加显色剂A液、B液各50μL，充分混匀，封板，置37℃孵育15min。⑥每孔加入终止液50μL，混匀。⑦用酶标仪读数，取波长在450nm，先用空白孔校零，然后读取每孔D值。
(2)类人乙型肝炎病理形态学观察
用肝脏穿刺法观察类人乙型肝炎病理形态学。用长12～15cm，内径3mm的长注射针头对20头奶牛11～12肋间进行穿刺，取肝脏组织活体样本，将其保存于10％福尔马林中。同时解剖HBsAg、HBeAg双阳性奶牛，做病理切片观察。用HE、VanGieson-氏、过碘酸一苯肼Schiff(PAS)希夫氏染色法分别对肝脏组织切片.进行染色，同时用透视电镜做超微结构观察。另将一部分肝脏组织活体样本放在灭菌的平皿中，剪碎研磨，用灭菌生理盐水稀释后，吸取上清液1.5mL，置Eppendorf管中，经差数离心和饱和硫酸铵沉淀，初提物再经150、300、500g/L蔗糖梯度离心，PEG浓缩后，负染，电镜观察病毒颗粒。
(3)补体结合反应检测牛传染性胸膜肺炎
血清(包括被检血清(样品血清)、阳性血清(补体结合试验标准血清)、阴性血清(补体结合试验标准血清)、致敏红细胞(对照)、抗原(对照)孔分别加入抗原(补体结合试验抗原)，阴性血清对照孔、致敏红细胞对照孔不加抗原；然后分别加入补体，致敏红细胞对照孔不加补体；再加入灭菌巴比妥缓冲液，振荡混匀后置37℃水浴30min；再加入6％致敏红细胞(绵羊红细胞与15个单位的溶血素混合液)，振荡均匀后置37℃30min，2000r/min离心5min，观察结果。
二、试验结果
1.奶牛乙型肝炎
(1)奶牛肝功能检测
对HBsAg、HBeAg双阳性的奶牛进行肝功能检测，在10头双阳性中有8头的谷氨酸丙酮转氨酶(GPT)≥谷氨酸草酰酸转氨酶(GOT)，GPT在400～600U/L之間，表现为急性病毒性乙型肝炎(AHB)。2头奶牛血清GPT缓慢上升，缓慢下降，GPT在200—300U/L之间，表现为慢性病毒性乙型肝炎(CHB)。
(2)奶牛乙型肝炎病毒形态学观察
将HB-sAg、HBeAg双阳性奶牛肝脏组织做电镜观察，发现肝脏组织中有密集的HBV颗粒，包括大球形Dane颗粒、小球形颗粒、管球形颗粒3种。这些颗粒与人HBV的颗粒相似(图1)。
(3)奶牛乙型肝炎病理组织学观察
病牛肝脏主要表现为肝细胞的变性：胞浆疏松、气球样变(水肿变性)、脂肪变性、嗜酸性变、毛玻璃样变，肝细胞坏死，炎症细胞浸润，肝实质细胞增生和间质组织增生(图2、3)。
(4)奶牛乙型肝炎超微结构观察
肝细胞胞浆内线粒体变性、坏死、溶解、消失。核膜的双层膜不清晰或破裂，核孔增大。胶质纤维变性、严重肿胀、变性、坏死(图4、5)。
2.奶牛传染性鼻气管炎
传染性鼻气管炎抗体滴度测定结果
对29份阳性反应奶牛血清中和抗体滴度进行测定，血清两倍递增稀释，从1：1～1：32，结果均为阳性反应(中和指数在50％以上为阳性)(表1)。
三、治疗
目前奶牛乙型肝炎、传染性鼻气管炎尚无有效的治疗药物，只有对症治疗。为防止细菌的继续感染，可应用抗病毒药物和广谱抗生素或磺胺类药物进行治疗，高热时可注射复方氨基比林20～40mL。同时，也可强心、补液、解毒治疗，如林格氏液1000～3000mL/次，安钠加2～5g/次、VC2～4g/次，每日2次。如关节痛可注射水杨酸钠溶液。
四、综合防制措施
从科学养殖人手，改善饲养环境，加强综合管理，采用合理的免疫程序。
1.预防注射
免疫是预防各种疫病的有效手段，特别是目前需要免疫的疫苗种类很多，一定要制定合理的免疫程序，适时做好奶牛类人乙型肝炎、传染性鼻气管炎的免疫。用牛传染性鼻气管炎灭活苗免疫奶牛，经过半年的观察，临床症状好转；对疫区和受威胁区6月龄以上的牛，必须每年接种1次牛传染性鼻气管炎灭活苗。当暴发本病时，应立即隔离，同时对所有牛进行牛传染性鼻气管炎的疫苗接种。牛传染性鼻气管炎疫苗目前有3种：鼻内注射苗、匈牙利热稳定苗和灭活疫苗(即为甲醛灭活的氢氧化铝胶浓苗)，可根据疫苗说明书选用。不从疫区引进牛，发病地区建议在首次免疫后或紧急免疫后21～28d进行一次加强免疫。建议规模化奶牛场加强牛群免疫抗体的监测，抗体水平低下时应及时补免。
2.严格执行检疫制度
从没有疫情的地方购进奶牛，购买前要查看检疫证明，购进后一定要隔离饲养14d以上，无异常情况再混群饲养。
3.加强饲养管理
采用全进全出的养殖模式。冬天既要注意牛舍的保暖，又要注意通风。在高热季节，做好奶牛舍的通风和防暑降温，提供充足的清洁饮水。保持牛舍干燥，保持合理的饲养密度，降低应激因素。保证充足的营养，增强奶牛群抗病能力。
4.对饲养环境执行严格消毒
搞好环境卫生，及时清除奶牛舍粪便及排泄物，对各种污染物进行无害化处理。使用复合醛类等消毒剂对饲养场、奶牛舍内及周边环境进行消毒，农村散养奶牛专业户的牛圈舍可使用新鲜的生石灰进行消毒。
参考文献
[1]朱其太.牛传染性胸膜肺炎的研究概述[J].畜牧与兽医，1999，5：40～42
[2]姚春雨，张志刚，孙国权，等.酶联免疫吸附试验及其在奶牛疾病诊断中的应用[J].中国畜牧兽医，2008，35(3)：61～63.
[3]律祥君，崔金良，邹丽，等.黄牛感染人乙型肝炎病毒的研究[J].中国兽医科技，1992，22(4)：3～4
[关键词]乙型肝炎；奶牛传染病；检测
一、材料与方法
1.材料
乙型肝炎诊断试剂盒购于上海某生物有限公司；牛传染性胸膜肺炎补体结合反应抗原、标准阴性血清和阳性血清、溶血素补体由某生物制品厂提供；牛传染性鼻气管炎抗原、IBR弱毒株、阳性血清购于中国兽医药品监察所，阴性血清取自检查牛；奶牛血清来源于某省市的奶牛场和奶牛专业户。
2.方法
(1)酶联免疫吸附试验检测奶牛类人乙型肝炎
①每孔加入待检样品50μL，设阴、阳性对照各2孔，每孔50μL，并设空白对照1孔。②手工洗板，弃去孔内液体，洗涤液注满每孔静置5s，甩干、重复5次。③每孔加入酶结合物50μL(空白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃孵育30min。④重复操作②。⑤每孔加显色剂A液、B液各50μL，充分混匀，封板，置37℃孵育15min。⑥每孔加入终止液50μL，混匀。⑦用酶标仪读数，取波长在450nm，先用空白孔校零，然后读取每孔D值。
(2)类人乙型肝炎病理形态学观察
用肝脏穿刺法观察类人乙型肝炎病理形态学。用长12～15cm，内径3mm的长注射针头对20头奶牛11～12肋间进行穿刺，取肝脏组织活体样本，将其保存于10％福尔马林中。同时解剖HBsAg、HBeAg双阳性奶牛，做病理切片观察。用HE、VanGieson-氏、过碘酸一苯肼Schiff(PAS)希夫氏染色法分别对肝脏组织切片.进行染色，同时用透视电镜做超微结构观察。另将一部分肝脏组织活体样本放在灭菌的平皿中，剪碎研磨，用灭菌生理盐水稀释后，吸取上清液1.5mL，置Eppendorf管中，经差数离心和饱和硫酸铵沉淀，初提物再经150、300、500g/L蔗糖梯度离心，PEG浓缩后，负染，电镜观察病毒颗粒。
(3)补体结合反应检测牛传染性胸膜肺炎
血清(包括被检血清(样品血清)、阳性血清(补体结合试验标准血清)、阴性血清(补体结合试验标准血清)、致敏红细胞(对照)、抗原(对照)孔分别加入抗原(补体结合试验抗原)，阴性血清对照孔、致敏红细胞对照孔不加抗原；然后分别加入补体，致敏红细胞对照孔不加补体；再加入灭菌巴比妥缓冲液，振荡混匀后置37℃水浴30min；再加入6％致敏红细胞(绵羊红细胞与15个单位的溶血素混合液)，振荡均匀后置37℃30min，2000r/min离心5min，观察结果。
二、试验结果
1.奶牛乙型肝炎
(1)奶牛肝功能检测
对HBsAg、HBeAg双阳性的奶牛进行肝功能检测，在10头双阳性中有8头的谷氨酸丙酮转氨酶(GPT)≥谷氨酸草酰酸转氨酶(GOT)，GPT在400～600U/L之間，表现为急性病毒性乙型肝炎(AHB)。2头奶牛血清GPT缓慢上升，缓慢下降，GPT在200—300U/L之间，表现为慢性病毒性乙型肝炎(CHB)。
(2)奶牛乙型肝炎病毒形态学观察
将HB-sAg、HBeAg双阳性奶牛肝脏组织做电镜观察，发现肝脏组织中有密集的HBV颗粒，包括大球形Dane颗粒、小球形颗粒、管球形颗粒3种。这些颗粒与人HBV的颗粒相似(图1)。
(3)奶牛乙型肝炎病理组织学观察
病牛肝脏主要表现为肝细胞的变性：胞浆疏松、气球样变(水肿变性)、脂肪变性、嗜酸性变、毛玻璃样变，肝细胞坏死，炎症细胞浸润，肝实质细胞增生和间质组织增生(图2、3)。
(4)奶牛乙型肝炎超微结构观察
肝细胞胞浆内线粒体变性、坏死、溶解、消失。核膜的双层膜不清晰或破裂，核孔增大。胶质纤维变性、严重肿胀、变性、坏死(图4、5)。
2.奶牛传染性鼻气管炎
传染性鼻气管炎抗体滴度测定结果
对29份阳性反应奶牛血清中和抗体滴度进行测定，血清两倍递增稀释，从1：1～1：32，结果均为阳性反应(中和指数在50％以上为阳性)(表1)。
三、治疗
目前奶牛乙型肝炎、传染性鼻气管炎尚无有效的治疗药物，只有对症治疗。为防止细菌的继续感染，可应用抗病毒药物和广谱抗生素或磺胺类药物进行治疗，高热时可注射复方氨基比林20～40mL。同时，也可强心、补液、解毒治疗，如林格氏液1000～3000mL/次，安钠加2～5g/次、VC2～4g/次，每日2次。如关节痛可注射水杨酸钠溶液。
四、综合防制措施
从科学养殖人手，改善饲养环境，加强综合管理，采用合理的免疫程序。
1.预防注射
免疫是预防各种疫病的有效手段，特别是目前需要免疫的疫苗种类很多，一定要制定合理的免疫程序，适时做好奶牛类人乙型肝炎、传染性鼻气管炎的免疫。用牛传染性鼻气管炎灭活苗免疫奶牛，经过半年的观察，临床症状好转；对疫区和受威胁区6月龄以上的牛，必须每年接种1次牛传染性鼻气管炎灭活苗。当暴发本病时，应立即隔离，同时对所有牛进行牛传染性鼻气管炎的疫苗接种。牛传染性鼻气管炎疫苗目前有3种：鼻内注射苗、匈牙利热稳定苗和灭活疫苗(即为甲醛灭活的氢氧化铝胶浓苗)，可根据疫苗说明书选用。不从疫区引进牛，发病地区建议在首次免疫后或紧急免疫后21～28d进行一次加强免疫。建议规模化奶牛场加强牛群免疫抗体的监测，抗体水平低下时应及时补免。
2.严格执行检疫制度
从没有疫情的地方购进奶牛，购买前要查看检疫证明，购进后一定要隔离饲养14d以上，无异常情况再混群饲养。
3.加强饲养管理
采用全进全出的养殖模式。冬天既要注意牛舍的保暖，又要注意通风。在高热季节，做好奶牛舍的通风和防暑降温，提供充足的清洁饮水。保持牛舍干燥，保持合理的饲养密度，降低应激因素。保证充足的营养，增强奶牛群抗病能力。
4.对饲养环境执行严格消毒
搞好环境卫生，及时清除奶牛舍粪便及排泄物，对各种污染物进行无害化处理。使用复合醛类等消毒剂对饲养场、奶牛舍内及周边环境进行消毒，农村散养奶牛专业户的牛圈舍可使用新鲜的生石灰进行消毒。
参考文献
[1]朱其太.牛传染性胸膜肺炎的研究概述[J].畜牧与兽医，1999，5：40～42
[2]姚春雨，张志刚，孙国权，等.酶联免疫吸附试验及其在奶牛疾病诊断中的应用[J].中国畜牧兽医，2008，35(3)：61～63.
[3]律祥君，崔金良，邹丽，等.黄牛感染人乙型肝炎病毒的研究[J].中国兽医科技，1992，22(4)：3～4