【摘 要】
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目的 制备人的抗苗勒管激素(AMH)免疫磁珠及酶标抗体,初步建立一种基于纳米磁珠的双抗体夹心ELISA快速检测方法.方法 构建人AMH重组蛋白表达载体,表达和纯化AMH重组蛋白,将获
【机 构】
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昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明650500西南大学动物科学学院,重庆402460;
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目的 制备人的抗苗勒管激素(AMH)免疫磁珠及酶标抗体,初步建立一种基于纳米磁珠的双抗体夹心ELISA快速检测方法.方法 构建人AMH重组蛋白表达载体,表达和纯化AMH重组蛋白,将获得的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.通过聚乙二醇将脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,采用ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内腹水诱生法制备抗体,结合Western blot法评价单克隆抗体.利用蛋白A(Protein A)对抗体进行亲和层析纯化,将多克隆抗体作为捕获抗体偶联至纳米级羧基聚合物磁珠,以高碘酸钠法对单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记作为抗体探针,建立并优化基于纳米磁珠的双抗体夹心ELISA.结果 获得一株具有良好特异性的抗AMH单克隆抗体,其亚型为IgG2b,纯化的多克隆抗体和单克隆抗体的效价均可达1∶51 200.与磁珠偶联后的捕获抗体以及酶标记后的探针抗体仍然具有较好的活性.建立的方法可在1h左右检测出AMH抗原,检测下限在50 ng/mL左右.结论 制备的AMH免疫磁珠能够用于重组AMH的检测,具有快速、可视化的优点.
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