【摘 要】
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目的探讨活性维生素D（VitD）对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34（Vps34）的调控作用。方法 （1）体外培养永生化小鼠足细胞,用高糖30 mmol/L培养0、3、6、12、24
【机 构】
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东莞市第五人民医院肾内科; 广东省人民医院肾内科;
【基金项目】
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国家自然科学基金（81470950）;东莞市社会发展项目（2015108101024）
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目的探讨活性维生素D（VitD）对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34（Vps34）的调控作用。方法 （1）体外培养永生化小鼠足细胞,用高糖30 mmol/L培养0、3、6、12、24、36、48 h后,采用Western blot检测微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3-Ⅱ）、Beclin-1和Vps34的蛋白表达,激光共聚焦观察足细胞骨架蛋白Synatopodin、微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达变化;（2）1α,25二羟维生素D3[1α,25（OH）2D3]（1、10、100 nmol/L）和高糖（HG,30 mmol/L）培养足细胞48 h,激光共聚焦观察Synatopodin、LC3-Ⅱ的表达变化,透射电镜下观察足细胞内自噬体的形成,Western blot及RT-qPCR半定量检测LC3-Ⅱ、Beclin-1和Vps34的蛋白和mRNA表达;（3）加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA,10 mmol/L）作用48 h后,Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin-1和Vps34的蛋白表达。结果足细胞经高糖处理后LC3-Ⅱ表达增强,Beclin-1和Vps34的蛋白和mRNA水平也逐渐升高,24 h达高峰,随后表达逐渐降低（P<0. 05）。与高糖组相比,高糖+1α,25（OH）2D3（HG+VitD）组Beclin-1、Vps34蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性上调,抑制高糖长时刺激导致的自噬活性下降（P<0. 05）;与HG+VitD组相比,HG+VitD+3-MA组足细胞Beclin-1、Vps34蛋白和mRNA的表达明显降低（P<0. 05）。结论足细胞在高糖刺激下早期自噬活性增强,长期刺激自噬抑制;1α,25（OH）2D3可能是一种自噬活化剂,通过调控自噬相关蛋白Beclin-1、Vps34水平,促进自噬溶酶体形成,改善高糖诱导的足细胞损伤。
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