探讨小分子干扰RNA(siRNA)对人肝癌细胞株MHCC–97H Survivin基因表达及其增殖和凋亡的影响。
方法设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA，用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC–97H，实验分为3组：Survivin siRNA转染组(Si–survivin组)，无关siRNA转染组(NC组)和无转染组(正常对照组)。采用反转录–聚合酶链反应、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达；四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖情况；分别以终浓度为12.5、25.0、50.0 nmol/L的siRNA作用于细胞后24 h，采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡。
结果转染后48 h，Si–survivin组、NC组、正常对照组Survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.16、0.85±0.28、0.93±0.40，组间比较差异有统计学意义(F＝414，P<0.01)；Si–survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t＝–20.56、–28.37，P均<0.001)。siRNA转染48 h后，Si–survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白相对表达量分别为0.602±0.005、0.835±0.007、0.993±0.003，组间比较差异有统计学意义(F＝238，P<0.01)；Si–survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t＝–40.17、–66.03，P均<0.001)。转染后72 h和96 h，Si–survivin组细胞抑制率[(19.5±3.6)%、(12.0±0.9)%]显著高于NC组[(3.6±0.9)%、(–1.3±6.1)%]，差异均有统计学意义(t＝36.18、42.53，P均<0.05)。不同浓度siRNA作用于细胞后24 h，12.5、25.0、50.0 nmol/L siRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为(22.64±2.54)%、(35.37±3.28)%、(53.28±4.35)%、(8.77±1.25)%、(9.72±1.37)%]比较，组间差异有统计学意义(F＝35.93，P<0.01)，不同浓度siRNA间细胞凋亡率两两比较，差异有统计学意义(t＝–29.73、–38.57，P均<0.001)。
结论Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC–97H Survivin基因表达，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。