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目的
通过敲除成体小鼠Glial cells missing 2(Gcm2)基因,初步探索该基因在成体小鼠甲状旁腺功能减退症发病过程中的作用。
方法他莫昔芬诱导Gcm2E2fl/fl Cre-ER成体小鼠Gcm2基因条件性敲除,PCR鉴定敲除小鼠基因型,蛋白质印迹法检测甲状旁腺Gcm2蛋白的表达,钙磷测定试剂盒和ELISA法分别检测血清钙磷和甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)浓度变化,Ki-67免疫组化检测甲状旁腺细胞的增殖变化情况,Real-time PCR检测甲状旁腺PTH、钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)基因mRNA的表达,micro CT检测骨量变化。
结果PCR检测甲状旁腺组织基因组DNA呈Gcm2基因敲除型;与野生型对照组和Gcm2E2fl/fl Cre-ER小鼠溶剂对照组相比,Gcm2敲除组小鼠甲状旁腺Gcm2的蛋白表达明显下调(均P<0.01),血磷明显升高(均P<0.01),血钙和PTH浓度明显降低(均P<0.01),甲状旁腺细胞增殖明显增加(均P<0.01),甲状旁腺中PTH和CaSR的mRNA表达明显下调(均P<0.01)。
结论Gcm2基因的可诱导性条件性敲除可导致成体小鼠甲状旁腺功能减退,提示Gcm2基因可能为甲状旁腺功能减退症的重要治疗靶点之一。