【摘 要】
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目的 研究神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)在原位和体外培养成人Müller细胞中的表达特征.方法 取正常成人眼球,制备冷冻切片,采用免疫荧光方法对谷氨酸合成酶(GS)和nestin进
【机 构】
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复旦大学附属眼耳鼻喉科医院实验中心 上海200031;复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科 上海200031;中国科学院神经科学研究所 上海200031;
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目的 研究神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)在原位和体外培养成人Müller细胞中的表达特征.方法 取正常成人眼球,制备冷冻切片,采用免疫荧光方法对谷氨酸合成酶(GS)和nestin进行双标检测;采用免疫荧光方法检测原代和传代培养的Müller细胞nestin表达;取原代培养的成人Müller细胞给予过氧化氢(H2O2)刺激,采用免疫荧光方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和nestin的表达,并计数分析.结果 在成人眼球切片中,原位成人Müller细胞GS免疫荧光染色阳性,但nestin染色阴性.原代培养的Müller细胞中检测到部分nestin阳性表达的细胞,10代以内细胞nestin阳性比例为(15.16％±5.07％)～(22.42％±4.6％),且代次间无显著差异.H2O2刺激原代培养的Müller细胞后,GFAP阳性细胞数增加,是对照组的1.30 ～2.08倍,但nestin阳性细胞比例未见显著变化.结论 正常成人Müller细胞原位时呈静息状态,不表达干细胞标志物nestin;体外培养条件可能作为一种刺激因素使部分Müller细胞离开静息状态呈现干细胞特性;人Müller细胞在体外传代及H2O2刺激后nestin阳性细胞数未见显著变化,提示并非全部Müller细胞均具有干细胞潜能,成人Müller细胞可能存在不同的亚型.
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