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【摘要】归纳总结近年来国内外学者研究肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征（ ME/CFS）所使用的动物造模方法以及造模后的检测指标，推荐电脉冲刺激造模法配合多功能大鼠固定器，可能会是一种稳定、可靠且可量化评估的CFS动物模型造模方法。
【关键词】慢性疲劳综合征;动物模型
【中图分类号】R332
【文献识别码】B
【文章编号】1002-8714（ 2019） 03-0101-02
肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征（Myalgic encephalomyelitis/Chronicfatigue syndrome.ME/CFS）是在当代快节奏的生活方式下出现的一组以慢性疲劳为表现的全身性症候群。世界卫生组织（ WHO）认为ME/CFS是神经系统疾病。CFS影响所有年龄、种族/种族背景和经济状况的人，但病因与发病机制尚不明确，多数研究认为其可能与病毒感染、应激、免疫、遗传、过度劳累有关[1]。目前用于慢性疲劳综合症模型的动物主要有Sprague-Dawlev（ SD）大鼠、BALB/e小鼠等。然而迄今为止CFS动物模型制造方法较多，但尚无经典、公认的造模方法，本文旨在总结近年来CFS动物模型制造方法，寻找更好的造模方法，为CFS进一步研究提供基础。
1 造模方法
1.1 单因素造模法
1.1.1 强迫游泳法
强迫游泳法具有良好的操作性、重复性、运用范围广泛，深得国内外研究者喜爱。在小鼠模型中，有学者将实验动物放置在室温下（22±3℃）的容器（25cm×12cm×25cm）中进行游泳，水深为5cm，持续七天，每天6min以产生慢性疲劳状态;也有研究者使用每天10分钟的慢性浸水应激试验制造模型。大鼠模型中，将造模组放置于室温（23±1℃），水深1.5cm的笼子中1-5天，每24小时换一次水，对照组每24小时更换一次鼠笼;在室温下（24 - 28℃）强迫大鼠在一个含有30cm高的水的金属圆筒（直径35cm;高度45cm）中游泳，每天一次，每次15min，连续21天。在研究中亦没有考虑到环境的影响。
1.1.2 免疫模型
各种研究表明，免疫系统的激活在疲劳的发展中起着关键性的作用，而诱导白细胞介素（IL）的表达和升高的炎症介质是降低运动活动和其他疲劳相关行为的先決条件。国外研究者通过连续十九天腹腔注射给与小鼠脂多糖（ LPS） Img/kg引起急性免疫反应，诱导慢性疲劳综合症的产生;八周龄BALB/e小鼠，每2周通过六次反复注射B型流产抗原溶液（0.2ml/只），共造模12周以诱导慢性疲劳。反复注射B型流产抗原溶液可引起小鼠的活动迟缓和海马萎缩。但在诱导周期（12周）内，约有1/3的小鼠在抗原注射后即刻死亡[2]。
1.2 多因素造模法
冷水游泳：将大鼠置于直径40cm，高50cm，水深40cm的桶中，水温20℃左右，强迫大鼠游泳30min;束缚法：将大鼠四肢固定于固定器上，每次3h;跑台法：每天强迫大鼠进行1h（20m/min）的跑台运动;拥挤法：每组10只大鼠生活在一个标准饲养笼中，来模拟拥挤环境;昼夜颠倒法：早8：00将大鼠置于黑暗环境中，晚8：00将大鼠置于灯光照射环境中;夹尾法：每日夹尾四次，3min/次。每天随机安排一种刺激，持续两周确保造模成功。多因素法是国内研究者最常用的造模方法，多是上述造模法中的两种或多种的组合，造成动物的复合应激疲劳。
2 造模后评价方法
2.1 一般情况观察
主要观察实验动物的体重、饮食、饮水、活动情况、精神状态、步态的变化等。
2.2 行为学实验
主要包括力竭游泳实验、悬尾实验、Morris水迷宫实验、旷场实验、高架十字迷宫实验等。
2.3 生物化学参数
主要有氧化应激指标、中枢单胺类神经递质等。
3 讨论
近年来，通过采用动物模型发现炎症、细胞凋亡、氧化应激、应激信号通路、环境等因素在ME/CFS发生发展过程中均有作用。就本病的造模方式来说，目前尚无模型制作的统一标准。免疫与病毒模型是从本病可能的发病机制着手，发明的造模方式，虽有报道成功制出本病模型，但其标准仍难以把握，且本病病因及病理复杂，单一造模方式难以模拟。
电脉冲刺激法主要通过电刺激为应激原，使动物躯体和情绪长期处于紧张状态从而造成其应激疲劳，建立的CFS病理模型贴近临床且操作简单、可复制性高。具体方法为：将大鼠的两足踝关节用电解质溶液浸湿后固定于多功能大鼠固定器3并接通电针仪，使用频率为IOHz，强度为I.5V的随机波进行电脉冲刺激，l5min/次，每日一次，共刺激3周。电脉冲技术使刺激的效果可以被客观量化描述，其参数概念包括电针仪的频率、强度、波形以及刺激时间等，可在最大程度上模拟本病发生的复杂原因以及临床表现，与“心理疲劳”及“躯体疲劳”相符合，可能是一种安全、稳定、可量化评估的造模方法。
综上所述，CFS的病因与发病机制涉及多方面。因此，为研制出最稳定、可靠、重复性高且贴合临床的CFS动物模型，需要考虑多方面因素。目前，国内外同类课题研究小组都在继续探讨这一动物模型的研制方法及其更客观的评价指标，继而明确CFS的发病机制及病理生理，为疾病的诊断和防治提供理论基础。
参考文献
[1]
Rollnik JD.[ Chronic Fatigue Syndrome：A Critical Review]. Fortschritte derNeurologie-Psychiatrie. 2017; 85： 79-85.
[2] Junji M， Rui C，Jun-Ichi Y.Kenroh S， Yasuhito I， Takashi TJB， et al_ Resveratrolimproves hippocampal atrophy in chronic fatigue mice by enhancing neurogenesis andinhibiting apoptosis of granular cells. 2011; 34： 354-9
[3]魏群利，印晓星，魏彤，高媛，蒋玲，inventors; 一种大鼠固定器patentCN106539629A. 2016-11-24.
【关键词】慢性疲劳综合征;动物模型
【中图分类号】R332
【文献识别码】B
【文章编号】1002-8714（ 2019） 03-0101-02
肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征（Myalgic encephalomyelitis/Chronicfatigue syndrome.ME/CFS）是在当代快节奏的生活方式下出现的一组以慢性疲劳为表现的全身性症候群。世界卫生组织（ WHO）认为ME/CFS是神经系统疾病。CFS影响所有年龄、种族/种族背景和经济状况的人，但病因与发病机制尚不明确，多数研究认为其可能与病毒感染、应激、免疫、遗传、过度劳累有关[1]。目前用于慢性疲劳综合症模型的动物主要有Sprague-Dawlev（ SD）大鼠、BALB/e小鼠等。然而迄今为止CFS动物模型制造方法较多，但尚无经典、公认的造模方法，本文旨在总结近年来CFS动物模型制造方法，寻找更好的造模方法，为CFS进一步研究提供基础。
1 造模方法
1.1 单因素造模法
1.1.1 强迫游泳法
强迫游泳法具有良好的操作性、重复性、运用范围广泛，深得国内外研究者喜爱。在小鼠模型中，有学者将实验动物放置在室温下（22±3℃）的容器（25cm×12cm×25cm）中进行游泳，水深为5cm，持续七天，每天6min以产生慢性疲劳状态;也有研究者使用每天10分钟的慢性浸水应激试验制造模型。大鼠模型中，将造模组放置于室温（23±1℃），水深1.5cm的笼子中1-5天，每24小时换一次水，对照组每24小时更换一次鼠笼;在室温下（24 - 28℃）强迫大鼠在一个含有30cm高的水的金属圆筒（直径35cm;高度45cm）中游泳，每天一次，每次15min，连续21天。在研究中亦没有考虑到环境的影响。
1.1.2 免疫模型
各种研究表明，免疫系统的激活在疲劳的发展中起着关键性的作用，而诱导白细胞介素（IL）的表达和升高的炎症介质是降低运动活动和其他疲劳相关行为的先決条件。国外研究者通过连续十九天腹腔注射给与小鼠脂多糖（ LPS） Img/kg引起急性免疫反应，诱导慢性疲劳综合症的产生;八周龄BALB/e小鼠，每2周通过六次反复注射B型流产抗原溶液（0.2ml/只），共造模12周以诱导慢性疲劳。反复注射B型流产抗原溶液可引起小鼠的活动迟缓和海马萎缩。但在诱导周期（12周）内，约有1/3的小鼠在抗原注射后即刻死亡[2]。
1.2 多因素造模法
冷水游泳：将大鼠置于直径40cm，高50cm，水深40cm的桶中，水温20℃左右，强迫大鼠游泳30min;束缚法：将大鼠四肢固定于固定器上，每次3h;跑台法：每天强迫大鼠进行1h（20m/min）的跑台运动;拥挤法：每组10只大鼠生活在一个标准饲养笼中，来模拟拥挤环境;昼夜颠倒法：早8：00将大鼠置于黑暗环境中，晚8：00将大鼠置于灯光照射环境中;夹尾法：每日夹尾四次，3min/次。每天随机安排一种刺激，持续两周确保造模成功。多因素法是国内研究者最常用的造模方法，多是上述造模法中的两种或多种的组合，造成动物的复合应激疲劳。
2 造模后评价方法
2.1 一般情况观察
主要观察实验动物的体重、饮食、饮水、活动情况、精神状态、步态的变化等。
2.2 行为学实验
主要包括力竭游泳实验、悬尾实验、Morris水迷宫实验、旷场实验、高架十字迷宫实验等。
2.3 生物化学参数
主要有氧化应激指标、中枢单胺类神经递质等。
3 讨论
近年来，通过采用动物模型发现炎症、细胞凋亡、氧化应激、应激信号通路、环境等因素在ME/CFS发生发展过程中均有作用。就本病的造模方式来说，目前尚无模型制作的统一标准。免疫与病毒模型是从本病可能的发病机制着手，发明的造模方式，虽有报道成功制出本病模型，但其标准仍难以把握，且本病病因及病理复杂，单一造模方式难以模拟。
电脉冲刺激法主要通过电刺激为应激原，使动物躯体和情绪长期处于紧张状态从而造成其应激疲劳，建立的CFS病理模型贴近临床且操作简单、可复制性高。具体方法为：将大鼠的两足踝关节用电解质溶液浸湿后固定于多功能大鼠固定器3并接通电针仪，使用频率为IOHz，强度为I.5V的随机波进行电脉冲刺激，l5min/次，每日一次，共刺激3周。电脉冲技术使刺激的效果可以被客观量化描述，其参数概念包括电针仪的频率、强度、波形以及刺激时间等，可在最大程度上模拟本病发生的复杂原因以及临床表现，与“心理疲劳”及“躯体疲劳”相符合，可能是一种安全、稳定、可量化评估的造模方法。
综上所述，CFS的病因与发病机制涉及多方面。因此，为研制出最稳定、可靠、重复性高且贴合临床的CFS动物模型，需要考虑多方面因素。目前，国内外同类课题研究小组都在继续探讨这一动物模型的研制方法及其更客观的评价指标，继而明确CFS的发病机制及病理生理，为疾病的诊断和防治提供理论基础。
参考文献
[1]
Rollnik JD.[ Chronic Fatigue Syndrome：A Critical Review]. Fortschritte derNeurologie-Psychiatrie. 2017; 85： 79-85.
[2] Junji M， Rui C，Jun-Ichi Y.Kenroh S， Yasuhito I， Takashi TJB， et al_ Resveratrolimproves hippocampal atrophy in chronic fatigue mice by enhancing neurogenesis andinhibiting apoptosis of granular cells. 2011; 34： 354-9
[3]魏群利，印晓星，魏彤，高媛，蒋玲，inventors; 一种大鼠固定器patentCN106539629A. 2016-11-24.