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本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cytb基因序列，利用ABI primer express3．0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针。通过对引物和探针浓度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选，建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法。所建方法灵敏性高、特异性好，对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测，结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分。实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮